TINCIÓ D'HEMATOXILINA-EOSINA: CARACTERÍSTIQUES, USOS, TÈCNIQUES - QUIMICA - 2026

La tinció d'hematoxilina - eosina és una tècnica de coloració que utilitza la combinació dels colorants hematoxilina i eosina. Aquest parell de colorants fan un duo perfecte, ja que l'hematoxilina actua com un colorant bàsic i l'eosina és un colorant àcid.

La designació de colorants bàsics o àcids no es refereix a l'pH que obtenen en solució, sinó més aviat parla de la proporció que preval pel que fa a les càrregues aniòniques o catiòniques que posseeixen o per la ubicació de el grup cromòfor.

Epiteli cilíndric ciliat tenyit amb hematoxilina - eosina (HE) Font: Todd Straus and Vladimir Osipov

En aquest sentit, l'hematoxilina és considerat un colorant bàsic (catiònic) i per això té afinitat per les estructures àcides, com ara el nucli de les cèl·lules. Mentre que l'eosina a l'ésser un colorant àcid (aniònic) té afinitat per les estructures alcalines o bàsiques, com el citoplasma cel·lular.

Per aquesta raó, aquesta combinació de colorants és molt utilitzada per a la tinció de teixits, ja que permet distingir clarament els nuclis i els citoplasmes. Els nuclis es tenyeixen de color blau fosc o porpra i el citoplasma de rosat.

La tinció hematoxilina-eosina és una de les tècniques de coloració més utilitzades en l'àrea d'histologia i citologia, per la seva fàcil maneig i baix cost. S'utilitza per a la visualització de cèl·lules, fibres nervioses gruixudes i la presència de certs microorganismes en els teixits, com ara: paràsits, fongs i bacteris, entre altres.

Característiques

hematoxilina

La hematoxilina és un colorant neutre. No obstant això, el component que proporciona el color (cromòfor) està situat al centre catiònic o bàsic de la molècula. D'allí la seva afinitat per les estructures àcides. La seva fórmula química és C ₁₆ H ₁₄ O ₆ i el seu nom científic 7,11b-dihydroindeno chromene-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentol.

Tenyeix principalment els nuclis de les cèl·lules, ja que aquests són molt rics en àcids nucleics. També pot tenyir inclusions citoplasmàtiques d'origen viral.

Perquè l'hematoxilina pugui tenyir ha d'estar en estat oxidat i unit a un metall. Aquest últim servirà per fixar-se a el teixit, és a dir, actuarà com mordent.

Quan l'hematoxilina s'oxida s'anomena hemateína. L'oxidació s'aconsegueix per l'exposició a l'oxigen (envelliment) de l'reactiu o per substàncies que ajuden a la seva oxidació (oxidació química).

eosina

La eosina és un colorant que tenyeix de color vermell o rosat. És insoluble en aigua encara que hi ha una versió hidrosoluble. Generalment, l'eosina es prepara dissolent en alcohol (etanol a l'95 °).

Tenyeix citoplasmes, fibres musculars, organelos citoplasmàtics i col·lagen, però no tenyeix els nuclis cel·lulars. Això és a causa que es troba carregada de forma negativa, per tant, té afinitat per les estructures carregades positivament.

Hi ha dos tipus d'eosina la "I" i la "B". La eosina "I" se li coneix com eosina groga. El seu nom científic és tetrabromo fl uoresceína i la seva fórmula química és C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅.

D'altra banda, l'eosina "B" és de vegades anomenada eritrosina B blavosa. El seu nom científic és dibromodinitro fl uoresceína i la fórmula és C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉. Totes dues són molt similars i realment no és perceptible la diferència d'utilitzar una o una altra. No obstant això, la més popular és l'eosina "I".

La eosina té la propietat de distingir entre una cèl·lula viva i una morta, ja que només és capaç de travessar la membrana per tenyir el seu citoplasma quan les cèl·lules estan mortes, i el citoplasma de la cèl·lula incolora si aquesta roman viva.

usos

Tinció de fibres nervioses

Amb hematoxilina-eosina es poden tenyir i identificar les fibres nervioses gruixudes. No obstant això, no és útil per a pintar les fibres nervioses primes, ja que per poder visualitzar aquestes últimes es necessita una coloració d'argent.

Tincions de talls histològics de pell

A les tincions de la capa còrnia de la pell el colorant que actua és l'eosina, ja que a aquest nivell les cèl·lules no tenen nucli.

A la capa granulosa de la pell, l'hematoxilina tenyeix fortament als grànuls de queratohialina que es troben a l'interior de les cèl·lules granuloses. Per contra, l'estrat espinós de la pell és tenyit dèbilment amb l'hematoxilina, mentre que la capa basal o germinal si es tenyeix bastant.

La eosina tenyeix el citoplasma de totes les cèl·lules i la intensitat de la color pot variar entre una capa i una altra.

Tinció de mostres de femta amb hematoxilina-eosina

Gómez i col·laboradors, en 2005 van demostrar que la tinció amb hematoxilina -eosina va ser més eficaç per identificar casos de amibiasis per Entamoeba histolytica i Entamoeba dispar que el mètode de visualització a la fresca (solució salina i lugol) en pacients amb malaltia diarreica aguda.

També es va demostrar que té gran sensibilitat per detectar eritrofagocitosis (amebes que han fagocitat eritròcits).

Tinció de talls histològics per al diagnòstic d'infecció

Walwyn i col·laboradors, en 2004 van proposar l'ús de tincions histològiques per detectar microorganismes causants d'infeccions.

Utilitzant la coloració d'hematoxilina-eosina van aconseguir visualitzar infeccions causades per Clostridium, Actinomyces, espirils o Candida. També van aconseguir observar presència de l'paràsit Sarcoptes escabiei en talls de pell i inclusions virals per citomegalovirus i herpes en talls de diversos teixits.

tècniques

Per a mostres histològiques

La tinció de talls histològics passa per una sèrie de passos. El primer és l'obtenció de el tall histològic. Aquest ha de ser parafinat per després obtenir els talls (ultra-fins) amb un micròtom. La tècnica consta dels següents passos:

1-Eliminació de l'excés de parafina: per això es pot utilitzar xilol o Hemo -D, submergir per 3-5 minuts.

2-Rehidratació de la mostra: això s'aconsegueix submergint la mostra en diferents concentracions d'alcohols (etanol) en ordre descendent (100 °, 90 °, 70 °). En tots els casos per 7 minuts.

3-Eliminació de l'excés d'alcohol: per a això es submergeix en aigua per 7 minuts.

4-Coloració amb hematoxilina: la mostra es submergeix per 6-10 minuts en una safata que conté hematoxilina. El temps d'exposició depèn de la mida i gruix de la mostra.

5-Eliminació de l'excés d'hematoxilina: es renta amb aigua per 5 minuts i després es realitza un passatge ràpid (10-20 segons) per alcohol àcid. Posteriorment es renta amb aigua de nou per 5 minuts. Després es submergeix en etanol a 96 ° per 1 minut.

6-Coloració amb eosina: per a això es submergeix la mostra per 5 minuts a la safata d'eosina.

7-Deshidratació de la mostra: per a això es torna a passar per les safates d'alcohols (etanol), però aquesta vegada en ordre ascendent. (70 °, 90 °, 100 °). (Per 5 segons, 5 segons, 1 minut respectivament).

8-Clarificació de la mostra: per a això s'exposa a l'xilol per 5-10 minuts i s'asseca per segellar de forma definitiva amb bàlsam del Canadà o un altre material semblant.

Per a mostres de femta a la recerca de

En una laminilla es realitza un estès amb la femta de l'pacient i es fixa amb alcohol a l'80% durant 5 minuts. La làmina es submergeix en hematoxilina per 5 minuts i immediatament es renta amb aigua.

Posteriorment, se submergeix ràpidament en alcohol àcid i després en aigua amoniacal. Es renta amb aigua. Es acoloreix per 5 minuts a eosina. Es deshidrata la mostra com va ser explicat en la tècnica anterior i finalment s'aclareix amb xilè.

Preparació dels reactius

- Hematoxilina

En un litre d'aigua destil·lada dissoldre 50 grams de sulfat alumínic potàssic o d'amoni. Quan estigui completament dissolt, afegir 1 gram d'hematoxilina cristal·litzada. A l'dissoldre íntegrament, s'addiciona 1 gr d'àcid cítric al costat de 50 gr d'hidrat de cloral i 0,2 g de iodat de sodi.

La barreja es bull per 5 minuts, després es deixa refredar i es filtra per eliminar les partícules sòlides que hagin quedat. El reactiu així preparat pot ser usat immediatament.

- Eosina

Es pot preparar amb base alcohòlica o amb base aquosa.

eosina alcohòlica

En 100 ml d'etanol a 95 ° dissoldre 0,5 grams d'eosina "I". Després afegir unes gotes d'àcid acètic glacial.

Eosina aquosa a el 2%

En 1250 ml d'aigua destil·lada dissoldre 25 grams de eosina "I" hidrosoluble. Després afegir unes gotes d'àcid acètic glacial.

Alcohol àcid

Mesurar 0,5 ml d'àcid clorhídric concentrat i completar a 100 ml amb alcohol absolut.

aigua amoniacal

Mesurar 0.5 ml d'amoníac concentrat i completar a 100 ml amb aigua destil·lada.

referències

1. Navarrete, G. Histologia de la pell. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Disponible a: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castell J, Castell J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. Identificació de l'Entamoeba histolytica / E. dispar per la tècnica de ameba en fresc vs seu tinció amb hematoxilina-eosina en la diarrea aguda. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Disponible a: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Utilitat de tècniques histològiques per al diagnòstic d'infecció en peces anatòmiques. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Disponible a: scielo.sld
5. Panreac AppliChem ITW Reagents. Tinció hematoxilina-eosina. 2017, Espanya. Disponible a: itwreagents.com
6. «Eosina.» Viquipèdia L'enciclopèdia lliure. 7 nov 2018, 08:18 UTC. 4 ago 2019, 22:13 es.wikipedia.org
7. «Hematoxilina.» Viquipèdia L'enciclopèdia lliure. 3 maig 2019, 11:23 UTC. 4 ago 2019, 22:48 wikipedia.org