SAFRANINA: CARACTERÍSTIQUES, ÚS, TÈCNIQUES, TOXICITAT - QUIMICA - 2026

La safranina és un colorant meriquinoide, anomenat així per posseir en la seva estructura química de 2 anells bencenoides i de 2 anells quinoides, sent aquests últims els que proporcionen el color vermell.

També és cridada dimetil safranina o vermell bàsic 2 en la seva forma resumida, ja que el seu nom científic és 3,7-diamino-2,8-dimetil-5- fenil-fenaziniumcloro dimetil safranina i la fórmula química és C ₂₀ H ₁₉ N ₄ cl.

Estructura química de la safranina indicant els anells bencenoides i quinoides / Solució aquosa de safranina. Font: NEUROtiker editada per MSc. Marielsa Gil / LHcheM

Hi ha una variant denominada trimetil-safranina però no hi ha una diferència significativa entre les dues substàncies.

La safranina és un colorant monocromàtic i, segons les característiques de la fórmula química, és una substància amb càrrega positiva. Per tant, té afinitat amb estructures carregades negativament. Aquestes estructures seran tenyides de color vermell.

Aquesta propietat li confereix aplicabilitat en moltes tècniques histològiques per tenyir diverses estructures cel·lulars, tant d'organismes eucariotes com procariotes.

La safranina és utilitzada com a colorant de contrast en importants i conegudes tècniques d'ús rutinari en bacteriologia. Aquestes tècniques són: la tinció de Gram-Hucker, la tinció de Schaeffer Fulton per espores o la tinció de càpsules bacterianes, entre d'altres.

Característiques

El color de l'safrà (espècia obtinguda dels estigmes de la flor de Crocus sativus) va ser la inspiració per a col·locar-li el nom a aquest colorant. De el terme safrà prové el nom de safranina. Això es deu a la gran similitud entre el color de l'safrà i la coloració que brinda aquest colorant.

La safranina s'aconsegueix com vidres o en pols, sent ambdues presentacions solubles en aigua. El colorant de safranina no posseeix olor. Tenyeix les estructures de color vermell. Les estructures que atreuen el colorant de safranina s'anomenen safranófilos.

Estructuralment la safranina és complexa, posseeix dos anell bencenoides als extrems i al centre estan ubicats els dos anells quinoides on es troba el catió N ⁺. El centre de l'estructura és el sistema encarregat de proporcionar el color. Per aquesta característica aquest colorant és classificat dins la categoria II.

ús

La safranina s'utilitza per tenyir diverses estructures. Especialment ressalta les cèl·lules de Kulchitsky presents en el tracte gastrointestinal, anomenades també cèl·lules enterocromafines.

És capaç de tenyir microorganismes pertanyents a la família Rickettsiaceae. Així mateix, s'utilitza en diverses tècniques, com ara el mètode de Koster, un modificat utilitzat per a la tinció de bacteris de l'gènere Brucella.

D'altra banda, la safranina és usada en la tècnica de tinció d'espores de Schaeffer Fulton i en la tinció de Gram-Hucker. En ambdues tècniques, la safranina funciona com un colorant de contrast.

A la primera les espores prenen el color de l'verd de malaquita i la resta de les estructures s'han de vermell per la safranina. A la segona, els bacteris Gram negatives perden el color de l'cristall violeta en el pas de decoloració, per tant la safranina és qui tenyeix als bacteris Gram negatives de vermell.

Addicionalment, la safranina s'utilitza en bacteriologia per preparar mitjans d'agar Brucella amb una dilució de safranina 1: 5000. Aquest mitjà serveix per diferenciar l'espècie Brucella suis de la resta de les espècies. Brucella melitensis i Brucella abortus creixen en aquest mitjà però B. suis és inhibida.

En el camp agroindustrial, la safranina ha estat utilitzada a l'2,25% i diluïda 1:10 per tenyir mostres de tija de la planta canya de sucre.

Aquesta planta és comunament afectada pel bacteri Leifsonia xyli subsp. xyli, qui fa malbé el xilema de la planta. Les tiges tenyits són avaluats per determinar la funció dels vasos de xilema.

Tècniques en l'àrea de bacteriologia

Tinció de Castañeda per tinció de r

Un frotis de sang o teixit es col·loca en una solució de memòria intermèdia (amortidora de fosfat pH 7,6). Es deixa assecar espontàniament i després es cobreix amb blau de metilè durant 3 minuts i es contratiñe amb safranina. Les rickèttsies s'acoloreixen de blau, contrastant amb el fons vermell.

Tinció de Koster modificat per

Es realitza un frotis i es flameja en l'encenedor per a la seva fixació. Posteriorment, es cobreix amb una barreja de 2 parts de safranina aquosa saturada amb 3 parts de solució de KOH 1 mol / L, durant 1 minut. Es realitza un rentat amb aigua destil·lada i es contratiñe amb blau de metilè fenicado a l'1%.

Si la mostra conté bacteris de l'gènere Brucella aquestes s'han d'observar de color taronja en un fons blau.

Tinció de càpsules bacterianes

Es realitza una barreja de suspensió bacteriana amb tinta xinesa i se li addiciona safranina. A l'microscopi s'observarà un halo vermellós al voltant de cada càpsula bacteriana amb un fons negre.

Tinció d'espores

Es realitza un estès amb la suspensió bacteriana. Després es fixa a la calor. Es cobreix amb verd de malaquita a el 5%, flamejant freqüentment fins a l'emissió de vapors. Es repeteix el procés durant 6-10 minuts. Finalment, es renta amb aigua i es contratiñe amb safranina a l'0,5% per 30 segons. Els bacils es tenyeixen de vermell i les espores de verd.

Tinció de Gram-Hucker

Es realitza un estès amb suspensió bacteriana i es fixa a la calor. Es cobreix la làmina amb cristall violeta per 1 minut. Després es col·loca lugol com a solució mordent per 1 minut. Posteriorment, es descoloreix amb alcohol acetona i finalment es contratiñe amb safranina per 30 segons.

Els bacteris Gram positives es tenyeixen de color violeta blavós i els bacteris Gram negatives de vermell.

Alguns laboratoris han deixat de fer servir la tècnica de Gram-Hucker per adoptar la tècnica modificada de Gram-Kopeloff. En aquesta última se substitueix la safranina per fucsina bàsica. Això és degut al fet que la safranina tenyeix dèbilment a espècies dels gèneres Legionella, Campylobacter i Brucella.

Tècniques en l'àrea d'histologia

Tinció de cèl·lules Kulchitsky (enterocromafines)

Es tenyeixen els talls de teixit de l'tracte gastrointestinal amb clorur de plata. Després es descoloreix amb tiosulfat de sodi i finalment es contratiñe amb safranina.

Les cèl·lules de Kulchitsky es distingeixen perquè es presenten amb grànuls de color marró negrós.

Tinció per a detecció de osteoartritis

La safranina causa que posseeix càrrega positiva s'uneix molt bé als grups carboxils i sulfats dels glicosaminoglicans. Aquests formen part dels proteoglicans que constitueixen el cartílag articular. En aquest sentit, a l'tenyir amb safranina O, es pot identificar si hi ha pèrdua o no de l'cartílag.

La pèrdua de teixit cartilaginós es pot mesurar a través de l'escala de Mankin o també anomenada escala d'artrosi.

A continuació s'explica la tècnica: el tall histològic es submergeix en una safata amb solució d'hematoxilina fèrrica de Weigert, després es passa per alcohol àcid i es renta amb aigua.

Continuar el procés de coloració submergint la làmina en verd ràpid, es renta amb àcid acètic i ara es submergeix en safranina O. Per finalitzar el procés es deshidrata utilitzant alcohols a diferents concentracions en ordre ascendent. L'últim pas requereix de xilè o xilol perquè la mostra s'aclareixi.

Les làmines es condicionen amb bàlsam de Canadà o similar per ser observades a l'microscopi.

Amb aquesta tècnica, els nuclis es tenyeixen de negre, l'os de verd i el cartílag on es troben els proteoglicans de vermell.

Tinció per a la identificació de macroalgues

Pérez i col a l'any 2003 van proposar una tècnica senzilla i econòmica per tenyir a les macroalgues. Les mostres es preparen en talls histològics amb parafina. Els talls es fixen amb 1% de glicerina, deixant-se assecar completament. Després es col·loca en xilol per eliminar la parafina.

El tall es rehidrata, fent-ho passar per una sèrie de safates que contenen etanol en diferents graus de concentració (ordre descendent), durant 2 min en cadascuna.

Posteriorment, es tenyeix per 5 minuts amb una barreja 3: 1 de safranina a l'1% amb blau de toluidina també a l'1%, tots dos preparats amb etanol a l'50%. A la barreja se li S'afegeixen tres gotes d'àcid pícric que actua com a mordent.

Després es deshidrata passant novament per les safates d'alcohols, però aquesta vegada de forma ascendent. Finalment s'aclareix amb xilol i es prepara la mostra amb bàlsam de Canadà per ser observada.

toxicitat

Afortunadament, la safranina és un colorant que no representa un perill per a qui el manipula. És un colorant innocu, no és cancerigen i tampoc és inflamable.

A el contacte directe amb la pell o mucoses pot causar un lleuger enrogiment de la zona, sense més complicacions. Per a això es recomana rentar l'àrea afectada amb abundant aigua.

referències

1. García H. Colorant safranina O. Tècnica en salut, 2012; 1 (2): 83-85. Disponible a: medigraphic.com
2. Gil M. Tinció de Gram: fonament, materials, tècnica i usos. 2019. Disponible a: lifeder.com
3. Gil M. Tinció d'espores: fonament, tècniques i usos. 2019. Disponible a: lifeder.com
4. Safranina. » Viquipèdia L'enciclopèdia lliure. 7 març 2017, 10:39 UTC. 3 ago 2019, 20:49 es.wikipedia.org
5. Pérez-Cortez S, Vera B, Sánchez C. Tècnica de coloració útil en la interpretació anatòmica de Gracilariopsis tenuifrons i Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Acta Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. Disponible a: scielo.org.
6. Església Aleika, Peralta Esther Lilia, Álvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Relació de la funcionalitat dels gots de l'xilema i la presència de Leifsonia xyli subsp. xyli. Rev. Protecció Veg. 2007; 22 (1): 65-65. Disponible a: scielo.sld