REACCIÓ XANTOPROTEICA: FONAMENT, PROCEDIMENT, ÚS - QUIMICA - 2026

La reacció xantoproteica és un procediment químic utilitzat per determinar presència o absència d'aminoàcids aromàtics, com ara la tirosina i el triptòfan, que poden estar de forma lliure o constituint proteïnes solubles, pèptids o polipèptids.

També s'ha utilitzat per detectar substàncies tòxiques a nivell de la sang que contenen un grup benzènic en la seva estructura. Aquesta prova també es coneix com a reacció xantoproteica de Becher.

Reacció xantoproteica positiva Font: Presa de el vídeo:

La reacció xantoproteica utilitza àcid nítric concentrat, calor i un àlcali neutralitzador. Si a l'neutralitzar la reacció la solució vira de color groc a taronja la prova es considera positiva. La coloració observada és deguda a la formació de compostos nitrogenats derivats de la nitrificació dels grups benzènics.

Si es necessita quantificar la quantitat de proteïnes totals, cal utilitzar altres mètodes de determinació de proteïnes, tal com el Biuret.

La reacció xantoproteica és útil sobretot quan s'estan analitzant substàncies a les que no se li coneix la seva composició química. En general aquesta reacció forma part d'un conjunt de proves que ajudaran a determinar la composició química d'una substància o extracte determinat. És per això que, és molt utilitzat pels investigadors.

D'altra banda, la reacció xantoproteica de Becher s'utilitza per detectar substàncies fenòliques i indólicas a la sang, sent possible predir l'aparició d'una nefropatia, abans que s'augmentin altres paràmetres més tardans.

fonament

La reacció bàsicament detecta la presència de el grup benzènic, tant en aminoàcids, com en proteïnes i pèptids. L'àcid nítric actua sobre l'anell benzènic dels aminoàcids que el posseeixen, formant nitrocompuestos fenòlics.

La reacció necessita calor per dur-se a terme, en general es forma un precipitat que enterboleix el medi, tornant-lletós. El precipitat pot ser blanc o groc. Finalment, requereix un pas de alcalinització que accentua el color. Per a això s'utilitza una base com hidròxid de sodi a l'40% o amoníac.

La reacció serà interpretada com a positiva si s'observa una coloració groga fort durant el procés d'escalfament o taronja fosc a l'alcalinitzar la reacció. Els aminoàcids que detecta són principalment tirosina i triptòfan.

Reacció xantoproteica. Font:

En el cas de la fenilalanina, encara que és un aminoàcids aromàtic, el nucli benzènic d'aquest aminoàcid és difícil de ser nitratado en una reacció simple, per tant, emetrà o una reacció negativa o feblement positiva.

En general la prova xantoproteica es pot complementar amb la prova de Hopkins-Cole, la qual serveix per a identificar específicament triptòfan. Si la prova xantoproteica és positiva i la de Hopkins-Cole és negativa, es descarta la presència de triptòfan en aquesta solució, orientant la presència principalment de tirosina. Així mateix, es pot complementar també amb la reacció de Millon per a la detecció de tirosina, entre altres coses.

Aquesta reacció també pot ser usada sobre mostres de sang, plasma o sèrum desalbuminado per al diagnòstic d'uremia o insuficiència renal. En aquest cas, el que es busca és la detecció de substàncies tòxiques (fenòliques i indólicas) produïdes a partir de la putrefacció intestinal.

Aquestes substàncies posseeixen el grup benzènic i per tant, donen una reacció xantoproteica positiva, tot i que la substàncies reaccionant no és ni un aminoàcid, ni una proteïna.

procediment

- Reacció xantoproteica per a detecció d'aminoàcids amb grups aromàtics

Posar 1 ml de la mostra problema en un tub d'assaig net i sec.

-Agregar 0,5 ml d'àcid nítric concentrat.

-Incubar la barreja en un bany de Maria a 70 ° C per 2 minuts. Prèviament preparar el bany de Maria a la temperatura esmentada.

-Al treure el tub de l'bany de Maria és possible observar que la solució s'ha tornat lletosa i ha pres certa coloració blanca groguenca.

-Es refreda la solució deixant caure aigua freda a la base de l'tub.

-Es alcalinitza la preparació agregant lentament (gota a gota) una solució d'hidròxid de sodi al 40% fins que hi hagi un viratge de color.

-Si la prova és positiva es formarà un anell color taronja fosc en la interfície dels líquids.

-Si la reacció és negativa no hi haurà formació de color.

- Reacció xantoproteica per detectar substàncies fenòliques i indólicas a la sang

-Dispensar 5 cc d'àcid tricloroacètic a l'20% sobre 5 cc de sang venosa, plasma o sèrum, sent aquest últim el més indicat. Es barreja bé i es filtra.

-Es prenen 2 cc de l'filtrat i es barreja amb 0,5 cc d'àcid nítric. Després s'escalfa fins ebullició, per a això es col·loca el tub directament sobre la flama de l'encenedor per 30 segons. Es refreda amb aigua i s'agrega 1,5 de clorur de sodi a l'33%.

S'interpreta de la següent manera:

-Resultat negatiu: color groguenc.

-Resultat positiu (+) groc llimona.

- (++) groc or.

- (+++) groc fosc a marró

També es pot interpretar utilitzant una escala colorimètrica referencial de Autenrieth, constituïda per diverses concentracions de bicromat de potassi. Aquesta es prepara en dilucions de 10 a 10 a partir d'una solució mare de 0,03874%. Cada tub representa un percentatge.

Escales d'interpretació

Hi ha dues escales d'interpretació denominades antiga i moderna. Els valors normals són:

Taula antiga: entre 75 a 85%

Taula moderna: entre 15 a 25%

Si el color de l'tub problema es troba en el mig de dos tubs patrons es fa una mitjana entre les dues mesures.

La solució patró de dicromat de potassi es prepara de la següent manera: es mesura 7.9 ml de dicromat potàssic a el 10 N i s'enrasa fins a 100 ml en una pilota aforat. Per a les dilucions se segueix tal qual es mostra a la taula colorimètrica de Autenrieth.

Taula colorimètrica de Autenrieth. Font: Vásquez A. Reacció xantoproteica. Revista clínica espanyola. 1949; 35 (5): 326-327. Disponible a: Elsevier

ús

L'ús de la reacció xantoproteica forma part d'un set de proves bioquímiques que ajuden a conèixer la composició química d'alguna substància desconegudes. Aquesta prova aporta a l'anàlisi química la detecció de proteïnes que contenen grups benzènics en la seva estructura.

Aquesta reacció és molt utilitzada pels investigadors en diversos estudis de substàncies d'interès.

En aquest sentit, Vásquez-Jordi i col·laboradors van utilitzar aquesta i altres reaccions per investigar el contingut proteic de fluids extrets de l'Ostión de mangle (Crassostrea rhizophorae).

Així mateix, Rojas i col·laboradors (2009), van utilitzar una sèrie de proves, entre la qual es troba la reacció xantoproteica, per analitzar glicomacropéptidos en precipitats de lactosè- de ricotta.

D'altra banda, la reacció xantoproteica de Becher va ser modificada per Volhard per ser utilitzada amb altres finalitats. En aquest cas, per a la detecció de substàncies fenòliques i indólicas que poden elevar-se molt abans (setmanes o mesos) que s'incrementin els nivells d'urea i nitrogen residual en sang.

Aquests residus tòxics es formen a partir de la putrefacció intestinal dels aliments.

Aquestes substàncies s'acumulen en la sang quan no són eliminades correctament, per tant, una prova xantoproteica positiva pot predir la ràpida instauració d'una insuficiència renal pròpiament dita o un estat d'uremia.

Segons la intensitat del color es pot determinar que tan avançada està. En aquest cas la prova és quantitativa.

En persones sanes aquesta prova dóna un lleu color groc, corresponent als nivells normals de triptòfan i tirosina que pot haver-hi en la sang.

Mentre que, en els pacients renals la reacció xantoproteica dóna fortament positiva a causa de la presència de les següents substàncies: fenol, indol, paracresol, oxiácidos aromàtics, entre altres.

precaucions

Aquesta prova ha de ser realitzada per professionals capacitats. S'han de considerar totes les normes de bioseguretat, pel fet que els reactius utilitzats són àcids i bases corrosius.

Si per accident cauen unes gotes d'àcid nítric a la pell oa les ungles aquestes es tornaran de color groc, ja que ambdues estructures contenen proteïnes. A més, sobre la pell i mucoses causa cremades greus.

Si ocorre un contacte amb la pell, el protocol a seguir ha de ser rentar l'àrea immediatament amb aigua i sabó per 20 minuts aproximadament.

Si esquitxa cap als ulls s'ha de rentar amb abundant aigua fresca, tractant de mantenir els ulls oberts.

referències

1. «Reacció xantoproteica» Viquipèdia L'enciclopèdia lliure. 2 set 2019, 17:49 UTC. 21 oct 2019, 20:31 wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge I, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge I. Caracterització fisicoquímica i contingut de proteïnes d'extractes fluids de l'ostión de mangle (Crassostrea rhizophorae). Rev Cubana de Química, 2014; 26 (1): 66-74. Disponible en Redalyc.
3. Rojas E, Valbuena I, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. Aïllament i rendiment de l'GMP mitjançant precipitació de lactosèrum amb àcid tricloroacètic. Cient. (Maracaibo) 2009; 19 (3): 295-302. Disponible a: ve.scielo.
4. Vásquez A. Reacció xantoproteica. Revista clínica espanyola. 1949; 35 (5): 326-327. Disponible a: Elsevier
5. Gálvez I, Gárate O. Les reaccions de Becher i de Andrewes en cirurgia urinària. Servei d'Urologia de l'Hospital Espanyol. Revista argentina d'urologia 395-404