PROVA DE LA COAGULASA: FONAMENT, PROCEDIMENT I USOS - BIOLOGIA - 2025

La prova de la coagulasa és una tècnica de laboratori que s'utilitza per posar en evidència la presència de l'enzim coagulasa. Aquest enzim té la propietat de coagular el plasma. Loeb en 1903 va ser el primer a descriure a aquest enzim.

Aquesta prova es realitza als cocos Gram positius, catalasa positius, permetent distingir els ceps de Staphylococcus aureus de la resta dels estafilococs, ja que ell és l'únic microorganisme d'importància clínica que la produeix.

Les dues imatges revelen una Prova de la coagulasa positiva. Font: Imatge esquerra: Philippinjl. Imatge dreta: Fotografia presa per l'autora MSc. Marielsa Gil.

En aquest sentit, els membres de la Família Staphylococaceae que donen aquesta prova negativa són sovint denominats Staphylococcus coagulasa negatius.

Hi ha algunes soques diferents a S. aureus que poden produir coagulasa, com ara Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius i S. Delphini.

No obstant això, les tres primeres són d'importància clínica a nivell veterinari i molt poques vegades podrien trobar-se com agent causal d'infeccions en l'humà, mentre que S. Delphini se li troba únicament en ambients marins.

A més, es diferencien fàcilment perquè S. hyicus i S. intermedius no fermenten el manitol i S. schleiferi spp coagulans no fermenta la maltosa, ni la trehalosa, mentre que S. aureus sí fermenta aquests carbohidrats.

La presència de l'enzim coagulasa ha estat vinculada a la virulència dels ceps. No obstant això, aquesta teoria s'ha anat caient, en vista que s'observen altres espècies coagulasa negatives virulentes capaços de produir infeccions importants.

fonament

interpretació

Aglutinació dins dels 5 als 20 seg (prova positiva fort).

Aglutinació variable ocorreguda entre 20 segons i un minut (prova positiva retardada).

Cert grau d'aglutinació després d'un minut (prova dubtosa). Es recomana repetir la prova o confirmar pel mètode en tub.

No hi ha aglutinació (prova negativa).

Resultat amb SSF. Ha de donar sempre negativa, si dóna positiva automàticament el resultat de la prova queda invalidat.

Prova de la coagulasa en tub

materials

-Tub d'assaig estèril

-Plasma

-Bany de Maria a 37 ° C.

tècnica

Mesuri amb una pipeta estèril 0,5 ml de plasma i poseu-la a un tub d'assaig 12 x 75. Carregueu la nansa de platí amb 2 a 4 colònies pures a estudiar provinents d'un cultiu sòlid de 18 a 24 hores i dissolgui-la en el plasma acuradament, barregi i s'incubi a 37 ° C per 4 hores.

Examinar el tub a la primera hora sense agitar-lo, només s'inclini suaument. Si encara no s'observa coàgul, es pot seguir observant cada 30 minuts fins a completar les 4 hores. Si després de 4 hores encara segueix negatiu es pot deixar fins a per 24 hores però a temperatura ambient. Observar i reportar el resultat.

Basant-se l'experiència, alguns microbiòlegs recomanen utilitzar 500 ml d'una suspensió bacteriana provinent d'un cultiu de 18 hores en medi líquid per realitzar la prova.

A l'semblar ofereix resultats més ràpids i fiables que quan s'emulsionen colònies provinents de mitjans sòlids, especialment si s'ha fet servir plasma humà obtingut de l'banc de sang.

L'ús de ceps provinents d'un brou ajuda a diluir la possible presència d'anticossos anti-estafilocócicos humans en el plasma que puguin inhibir l'acció de la coagulasa.

interpretació

Si s'observa un coàgul que abasta tot el líquid (coagulació completa) o coàgul que res en el líquid restant (coagulació parcial) s'ha de considerar com una prova positiva.

Si no es forma coàgul, és a dir, la suspensió queda homogènia, la prova és negativa.

Prova de la coagulasa utilitzant fibrinogen

El fibrinogen s'utilitza igual que el plasma i serveix tant per a la prova en portaobjeto com per a la prova en tub. Procedir com va ser descrit per plasma i interpretar de la mateixa manera.

ús

S'utilitza per diferenciar el Staphylococcus aureus dels estafilococs coagulasa negatius.

Control de qualitat

Disposar de cultius frescos d'una soca de S. aureus per a ser usat com a control positiu. També es pot disposar d'una soca de S. epidermidis com a control negatiu.

limitacions

-Una prova positiva no s'ha de deixar en incubació per 24 hores, ja que el S. aureus produeix una fibrinolisina que dissol el coàgul.

-Per a una prova fiable s'ha d'utilitzar plasma fresc o recent reconstituït, així com també és important utilitzar cultius bacterians frescos (18 a 24 h). Això evita falsos negatius.

-La prova s'ha de fer conjuntament amb un control negatiu i un de positiu.

-Alguns mitjans sòlids poden interferir en la prova de la coagulasa. No es recomana utilitzar colònies provinents d'agar manitol salat.

-Si es fa servir plasma citratat es recomana col·locar 5 unitats d'heparina per ml de plasma per evitar falsos positius. Això es deu al fet que alguns microorganismes diferents a S. aureus poden descompondre el citrat i fer que el plasma es coaguli. En aquest cas és recomanable fer Gram i una prova de catalasa.

-És important, en la prova de el tub, monitoritzar la reacció cada 30 minuts, ja que hi ha ceps de S. aureus que produeixen altes concentracions de fibrinolisina i diluiran el coàgul acabat de formar ràpidament. Evita falsos negatius.

-Al monitoritzar la prova s'ha d'evitar agitar el tub de forma brusca, això pot destruir l'inici de la formació de l'coàgul que després no es restablirà, ocasionant falsos negatius.

referències

1. Köneman I, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnòstic Microbiològic. 5ta ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnòstic Microbiològic de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Proves bioquímiques per a la identificació de bacteris d'importància clínica. 3era ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Laboratoris Pro-Lab. Rabbit coagulase plasma. Disponible a: pro-lab.com
5. «Coagulasa.» Viquipèdia L'enciclopèdia lliure. 12 feb 2019, 04:23 UTC. 22 abr 2019, 15:50 wikipedia.org.