MICROSCOPI DE CAMP FOSC: CARACTERÍSTIQUES, PARTS, FUNCIONS - BIOLOGIA - 2025

El microscopi de camp fosc és un instrument òptic especial utilitzat en certs laboratoris. Aquest és el resultat d'una modificació realitzada a la microscòpia de camp clar. La microscòpia de camp fosc es pot aconseguir per trans-il·luminació o per epi-il·luminació.

La primera es fonamenta en bloquejar els raigs de llum que arriben a el condensador de forma directa, a través d'l'ús de dispositius que s'interposen abans que els raigs de llum arribin a l'condensador.

Microscopi de camp fosc / treponemas vistos a microscopis de camp fosc. Font: Dietzel65 / Judith Miklossy, Sandor Kasas, Anne D Zürn, Sherman McCall, Sheng Yu and Patrick L McGeer

El camp fosc amb llum transmesa permet ressaltar les estructures, podent-se observar partícules extremadament primes. Les estructures s'observen amb certa refringencia o brillantor en un fons fosc.

Mentre que l'efecte de epi-il·luminació s'aconsegueix amb llum incident o obliqua. En aquest cas el microscopi ha d'estar equipat amb un filtre especial en forma de mitja lluna.

Amb la il·luminació incident les estructures observades es caracteritzen per presentar un efecte visual en alt relleu. Aquesta propietat permet destacar les vores de les partícules en suspensió.

A diferència de la microscòpia de camp clar, la de camp fosc és especialment útil per a la visualització de preparacions a la fresca que contenen partícules en suspensió, sense cap tipus de coloració.

No obstant això, té diversos desavantatges, entre elles que no pot ser utilitzat per a preparacions en sec o preparacions tenyides. No té bona resolució. A més per assegurar una bona imatge l'obertura numèrica dels objectius no pot superar a la de l'condensador.

Característiques

La composició de l'microscopi de camp fosc presenta modificacions importants pel que fa a el de camp clar, ja que els fonaments de les dues microscopías són oposades.

Mentre que en el camp clar es concentren els raigs de llum perquè aquests travessin la mostra de manera directa, al camp fosc es dispersen els fas amb la finalitat que només els fas oblics arribin a la mostra. Aquests són després dispersats per la mateixa mostra, transmetent la imatge cap a l'objectiu.

Si es tractés d'enfocar una làmina sense mostra s'observaria un cercle fosc, ja que sense mostra no hi ha res a dispersi la llum cap a l'objectiu.

Per obtenir l'efecte desitjat en el camp visual es necessita d'l'ús de condensadors específics, així com de diafragmes que ajuden a controlar els feixos de llum.

En un camp visual de camp fosc els elements o partícules en suspensió es veuen brillants i refringents mentre que la resta de camp és fosc, fent un contrast perfecte.

Si s'utilitza llum obliqua o incident s'obté un efecte de vores amb alt relleu en les estructures observades.

Parts de l'microscopi de camp fosc

Font: amazon.com

Sistema mecànic

tub

És el dispositiu per on viatja la imatge reflectida i augmentada per l'objectiu fins a arribar a l'ocular o oculars.

revòlver

És el suport on s'ubiquen els diferents objectius. Els objectius no estan fixos, aquests poden remoure. El revòlver pot rotar de tal manera que es pot canviar d'objectiu quan l'operador així ho necessiti.

cargol macro

Aquest cargol és utilitzat per enfocar la mostra, es mou cap endavant o cap enrere per apropar o allunyar la mostra de l'objectiu i el moviment és grotesc.

cargol micromètric

El cargol micromètric es mou cap endavant o cap enrere per apropar o allunyar la mostra de l'objectiu. El cargol micromètric s'utilitza per moviments molt fins o delicats, gairebé imperceptibles. És el que aconsegueix l'enfocament definitiu.

platina

És el suport on reposarà l'espècimen sobre el portaobjectes. Posseeix una obertura central per on passen els feixos de llum. Quan es mouen els cargols macro i micromètric la platina puja o baixa, depenent de el moviment de l'cargol.

el carro

El carro permet que es pugui recórrer amb l'objectiu tota la mostra. Els moviments permesos són endavant i enrere i viceversa, i d'esquerra a dreta i viceversa.

pinces sujetadoras

Aquestes es troben sobre la platina, estan constituïdes de metall i tenen com a funció subjectar el portaobjeto per evitar que aquesta es rodi durant la seva observació. És important que la mostra es mantingui fixa mentre s'observa. Els sostenidors tenen la mesura exacta per rebre a l'portaobjeto.

Braç o nansa

El braç uneix el tub amb la base. És el lloc per on hauria d'agafar el microscopi quan es va a traslladar d'un costat a un altre. Amb una mà s'agafa el braç i amb l'altra mà se subjecta la base.

Base o peu

Com el seu nom indica és la base o suport de l'microscopi. Gràcies a la base el microscopi és capaç de mantenir-se fix i estable sobre una superfície plana.

Sistema òptic

objectius

Tenen forma cilíndrica. Posseeixen una lent a la part inferior que augmenta la imatge que prové de la mostra. Els objectius poden ser de diversos augments. Exemple: 4,5x (lupa), 10X, 40X i 100X (objectiu d'immersió).

L'objectiu d'immersió s'anomena així perquè necessita de la col·locació d'unes gotes d'oli entre l'objectiu i la mostra. Els altres són anomenats objectius secs.

Els objectius porten imprès les característiques que posseeixen.

Exemple: la marca de fabricant, la correcció de curvatura de camp, la correcció d'aberració, l'augment, l'obertura numèrica, les propietats òptiques especials, mig d'immersió, longitud d'el tub, distància focal, gruix de l'cobreobjectes i anell de codi de color.

Els objectius posseeixen un lent frontal ubicat a la part inferior i un lent posterior ubicat a la part superior.

oculars

Els microscopis vells són monoculars, és a dir, posseeixen un sol ocular, i els microscopis moderns són binoculars, és a dir, que tenen dos oculars.

Els oculars tenen forma cilíndrica i buida. Aquests posseeixen en el seu interior lents convergents que amplien la imatge virtual creada per l'objectiu.

L'ocular s'uneix amb el tub. Aquest últim permet que la imatge transmesa per l'objectiu arribi a l'ocular, que l'augmentarà novament.

L'ocular a la part superior conté un lent denominat ocular i en la seva part inferior hi ha un lent anomenat col·lector.

També posseeix un diafragma i depenent d'on s'ubiqui tindrà un nom. Els que se situen entre les dues lents es denomina ocular de Huygens i si se situa després de les 2 lents es diu ocular de Ramsden. Encara que existeixen molts altres.

L'augment de l'ocular oscil·la entre 5X, 10X, 15X o 20X, depenent el microscopi.

És a través de l'ocular o oculars que l'operador pot visualitzar la mostra. Alguns models porten un anell en l'ocular esquerre que és movible i permet l'ajust de la imatge. Aquest anell ajustable s'anomena anell de diòptries.

Sistema d'il·luminació

llum

És la font d'il·luminació i se situa en la part inferior de l'microscopi. La llum és halògena i és emesa de baix a dalt. En general el llum que posseeixen els microscopis és de 12 V.

diafragma

El diafragma dels microscopis de camp fosc no tenen Martí; en aquest cas aquest impedeix que els raigs que provenen del llum arribin de forma directa a la mostra, només els fas oblics toquessin l'espècimen. Aquells fas que siguin dispersats per les estructures presents a la mostra són els que passaran a l'objectiu.

Això explica perquè les estructures es veuen brillants i lluminoses en un camp fosc.

condensador

El condensador d'un microscopi de camp fosc difereix del de camp clar.

Hi ha dos tipus: els condensadors de refracció i els condensadors de reflexió. Aquest últim al seu torn es divideix en dues categories: els paraboloides i els cardioides.

Condensadors de refracció

Aquest tipus de condensador posseeix un disc que s'interposa per refractar els raigs de llum, pot situar-se sobre de la lent frontal o al costat posterior.

És molt fàcil d'improvisar un condensador d'aquest tipus, ja que només cal posar a el front de la lent frontal de l'condensador un disc elaborat en cartolina negra d'una grandària inferior a la lent (diafragma).

Un microscopi òptic de camp clar pot esdevenir un microscopi de camp fosc utilitzant aquest consell.

Condensadors de reflexió

Són els que utilitzen els microscopis estereoscopis. N'hi ha de dos tipus: paraboloides i cardioides.

• Paraboloides: posseeixen un tipus de curvatura anomenada paraboloides per la seva similitud a una paràbola. Aquest tipus de condensador és àmpliament usat en l'estudi de sífilis, ja que permet observar als treponemas.
• Cardioides: la curvatura de l'condensador és de forma similar a un cor, d'allí el nom que rep "cardioide", portant el condensador el mateix nom. Posseeix un diafragma que és regulable.

funcions

-És utilitzat per investigar la presència d'Treponema pallidum en mostres clíniques.

-També és útil per observar borrèlies i leptospiras.

-És ideal per observar el comportament in vivo de cèl·lules o microorganismes, sempre que no calgui detallar estructures específiques.

-És ideal per a ressaltar la càpsula o la paret dels microorganismes.

avantatges

-Els microscopis de camp fosc amb condensador de refracció són més econòmics.

-La seva ús és molt útil en augments de 40X.

-Són ideals per observar mostres que posseeixin un índex de refracció similar a el medi on es troben. Per exemple, cèl·lules en cultiu, llevats o bacteris mòbils com les espiroquetes (borrèlies, leptospiras i treponemas).

-Es pot observar la cèl·lula in vivo, el que permet avaluar el seu comportament. Per exemple, moviment brownià, moviment per flagels, moviment per emissió de pseudopodis, procés de divisió mitòtica, eclosió de larves, gemmacions de llevats, fagocitosi, entre d'altres.

-Permet ressaltar les vores de les estructures, per exemple la càpsula i la paret cel·lular.

-És possible analitzar partícules disgregades.

-No és necessari l'ús de colorants.

desavantatges

-S'ha de tenir especial cura a l'muntar les preparacions, ja que si queden molt gruixudes no s'observarà bé.

-La resolució de les imatges és baixa.

-Els microscopis de camp fosc que utilitzen condensadors de refracció presenten un percentatge de lluminositat molt baix.

-Per millorar la qualitat de la imatge amb objectiu d'immersió (100X) cal que es redueixi l'obertura numèrica dels objectius i així augmentar la de el con il·luminador. Per a això és indispensable la incorporació d'un diafragma addicional que pugui regular l'obertura numèrica de l'objectiu.

-No es poden visualitzar preparacions a l'sec, ni preparacions acolorides, llevat que siguin colorants vitals.

-No permet la visualització de certes estructures, especialment les internes.

-Els microscopis de camp fosc són més costosos.

referències

1. «Microscopi de camp fosc.» Viquipèdia L'enciclopèdia lliure. 26 ago 2018, 00:18 UTC. 30 jun 2019, 01:06
2. Agudelo P, Restrepo M, Moreno N. Diagnòstic de leptospirosi de mostres de sang i cultiu per observació en microscopi de camp fosc. Biomèdiques. 2008; 28 (1): 7-9. Disponible from: scielo.org
3. Rodríguez F. Tipus de Microscopis òptics. Bloc de Laboratori Clínic i Biomèdic. Disponible a: franrzmn.com
4. Wikipedia contributors. Dark-field microscopy. Viquipèdia The Free Encyclopedia. October 19, 2018, 00:13 UTC. Disponible a: wikipedia.org
5. Bhatia M, Umapathy B, Navaneeth B. An evaluation of dark field microscopy, culture and commercial serological kits in the diagnosi of leptospirosi. Indian J Med microbiol. 2015; 33 (3): 416-21. Disponible in: nlm.nih.gov