- fonament
- Font d'energia
- Producció de sulfur d'hidrogen
- Formació de indol
- motilitat
- preparació
- medi SIM
- Reactiu de Kovac's
- Reactiu de Erlich
- usos
- sembrat
- Control de qualitat
- limitacions
- referències
El medi SIM és un agar semisòlid i diferencial, especialment dissenyat per ajudar a la identificació d'alguns bacteris, principalment de la família Enterobacteriaceae. Està compost per tripteína, peptona, sulfat de ferro, sulfat d'amoni, tiosulfat de sodi i agar.
Aquest mitjà permet l'execució de tres importants proves: la producció de sulfur d'hidrogen (H 2 S), la formació d'indol i la motilitat, d'allí prové l'acrònim SIM. Per la seva gran utilitat no pot faltar en un laboratori de bacteriologia.
A. Medi SIM comercial B. Prova de SIM H2S (-), Indol (-) i Motilitat (+) i Prova SIM H2S (+), Indol (-), Motilitat (+). Font: A. Foto presa per l'autora MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza
A diferència d'altres mitjans, aquest ha de ser semisòlid perquè sigui detectable la capacitat de moviment que posseeixen alguns bacteris. En aquest sentit, aquesta prova funciona molt bé per enterobacteris, no així en bacils Gram negatius no fermentadors, on es prefereix usar altres mètodes, com ara la gota pendent.
El mitjà SIM permet distingir certes propietats específiques que caracteritzen alguns bacteris en relació a altres. Per exemple Escherichia coli es distingeix per ser H 2 S (-), Indol (+) i motilitat (+), mentre que Proteus mirabilis és H 2 S (+), indol (-), motilitat (+).
fonament
És un mitjà de cultiu que es considera diferencial, a causa de que el seu ús aconsegueix distingir entre els microorganismes capaços de produir sulfur d'hidrogen dels que no ho fan; també destaca aquelles que formen indol a partir de l'triptòfan de les que no el formen, i finalment diferència dels bacteris mótiles de les immòbils.
Font d'energia
Com tot mitjà de cultiu, posseeix elements que brinden els nutrients necessaris perquè puguin desenvolupar-se els microorganismes no exigents. Aquests elements estan representats per les peptones i la tripteína.
El desenvolupament de l'microorganisme en el medi és essencial per poder observar la presència o absència de les característiques que avalua aquest mitjà.
Producció de sulfur d'hidrogen
La lletra S de l'acrònim SIM fa referència a la producció de sulfur d'hidrogen (H 2 S). Els bacteris capaços de formar sulfur d'hidrogen prendran el sofre de l'tiosulfat de sodi.
Un cop format el H 2 S -gas incoloro-, aquest reacciona amb la sal de ferro present en el medi, formant sulfur ferrós, clarament visible (precipitat negre). Els bacteris que no formen H 2 S, deixen el mitjà de la color original (beix).
La presència de l'precipitat negre, pot obstaculitzar la interpretació de la motilitat. No obstant això, se sap que la majoria dels enterobacteris productores d'H 2 S són motilitat positiva, com ara Salmonella, Proteus i Citrobacter. A més, el precipitat negre que abasta gairebé la totalitat de l'mig, suggereix motilitat positiva.
Formació de indol
La segona lletra de l'acrònim SIM és la "I", la qual representa la formació d'indol.
En aquest sentit, la tripteína, a més de ser una font de nutrient, compleix una altra funció fonamental. Aquesta peptona és rica en un aminoàcid anomenat triptòfan, per tant, pot evidenciar als bacteris que produeixen triptofanasa.
Aquest enzim és l'encarregada de CLIVAR a l'aminoàcid triptòfan, amb la conseqüent formació d'indol (substància incolora), àcid pirúvic i amoni.
És per això que, per evidenciar aquesta reacció cal afegir una substància reveladora (reactiu d'Ehrlich o reactiu de Kovac's). Qualsevol dels dos reacciona amb l'indol, formant una substància de color vermell-fúcsia en forma d'anell en la superfície de l'agar. Si l'anell color fúcsia apareix la prova d'indol s'interpreta com a positiva.
Els bacteris que no posseeixin aquest enzim, no formaran l'anell i s'interpreta com una prova d'indol negativa.
És important destacar, que la prova de l'indol ha de ser l'última a interpretar-se, ja que un cop afegit el reactiu, el medi s'enterboleix dificultant la visualització de la motilitat.
motilitat
Finalment la lletra "M" de la paraula SIM significa motilitat. Per tal de poder avaluar la motilitat, aquest mitjà és estratègicament semi-sòlid, ja que aquesta característica és essencial per poder observar si existeix o no moviment bacterià. Els bacteris que posseeixen flagels són les que donen aquesta prova positiva.
Una prova positiva es posarà en evidència quan s'observi terbolesa, tant en el inòcul inicial, com al voltant d'aquest. Com a, els bacteris no mòbils només es desenvolupen en el trajecte de l'inòcul inicial.
preparació
medi SIM
Pesar 30 g de medi deshidratat i dissoldre en un litre d'aigua destil·lada. La barreja es deixa en repòs per 5 minuts i després s'escalfa fins bullir, agitant freqüentment fins a la seva completa dissolució.
Distribuir la barreja en tubs d'assaig amb tapa de cotó i autoclavar a 121 ° C per 15 minuts. Treure la gradeta de tubs de l'autoclau i deixar solidificar en posició vertical, perquè el medi quedi en forma de tac.
Per a la seva conservació es guarda a la nevera fins al seu ús. El medi preparat ha de tenir un pH final de 7,3 ± 0,2.
A l'hora d'inocular el medi aquest ha d'estar a temperatura ambient. El color de l'mitjà és beix.
Reactiu de Kovac's
Mesurar 150 ml d'alcohol amílic o isoamílic o butílic. (Utilitza un dels tres esmentats).
Dissoldre 10 g de p-dimetilaminobenzaldehído. Després, afegir lentament 50 ml d'àcid clorhídric concentrat.
El reactiu llest per al seu ús és incolor o groc clar. Ha de conservar-se en flascó ambre i guardar-se en nevera. No utilitzar si pren un color castany fosc; això indica que està malmès. Aquest reactiu es prefereix quan es tracta d'enterobacteris.
Reactiu de Erlich
Pesar 2 g de p-dimetilaminobenzaldehido i dissoldre en 190 ml d'alcohol etílic absolut i barrejar lentament amb 40 ml d'àcid clorhídric concentrat. Conservar d'igual manera a el reactiu de Kovac's. El reactiu d'Ehrlich s'usa mes per bacteris no fermentadors i anaerobis.
usos
El medi SIM és altament utilitzat en els laboratoris de bacteriologia. Té com a avantatge que en un mateix tub poden observar tres característiques essencials en la identificació dels enterobacteris.
sembrat
La manera correcta de sembrar aquest mitjà és usant l'agulla, amb la qual es pren una porció de la colònia pura a estudiar i s'insereix en el centre de el medi en forma vertical. S'ha de realitzar una sola estocada. La punció no ha d'arribar fins al fons de l'tub, el correcte és abastar només les dues terceres parts de profunditat.
No és recomanable repetir el inòcul, ja que això pot comportar falses interpretacions de motilitat positiva. El medi inoculat s'incuba en aerobiosi a 37 ° C per 24 hores.
Conclòs el temps s'observa si hi va haver o no producció d'H 2 S i es llegeix la motilitat. Finalment es revela l'indol, afegint 3 a 4 gotes de el reactiu d'Ehrlich o Kovac's, es barreja suaument i s'interpreta.
Font: Köneman I, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnòstic Microbiològic. 5ta ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
Control de qualitat
Com a control d'esterilitat es cova un o dos tubs sense inocular en estufa a 37 ° C per 24 hores. S'espera que a el cap d'aquest temps no hi hagi creixement, ni canvi de color.
Com a control de qualitat es poden usar soques conegudes certificades, com ara: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.
Els resultats esperats són: Escherichia coli H 2 S negatiu, indol i motilitat positiu, Enterobacter aerogenes únicament motilitat positiu, Salmonella typhimurium H 2 S i motilitat positiu, amb indol negatiu. Proteus vulgaris tot positiu, mentre que Klebsiella pneumoniae i Shigella sonnei tot negatiu.
limitacions
-Algunes soques de Morganella morganii, entre d'altres soques poden produir un pigment terrós en aquest mitjà causa de la producció de melanina, això no s'ha de confondre amb el precipitat de sulfur ferrós. En professionals inexperts aquesta situació pot generar falsos positius en la interpretació de la prova d'H 2 S.
-Les bacteris aerobis estrictes creixeran únicament en la superfície de l'tub, el que dificulta la interpretació de la motilitat.
referències
- Laboratoris BD. BBL SIM Medium. 2008. Disponible a: bd.com
- Laboratoris Neogen. SIM Medium. Disponible a: foodsafety
- Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Medium. 2009. Disponible a:
- Laboratori Brizuela-Lab. SIM Mitjà. Disponible a:.brizuela-lab.com
- Laboratoris Britània. SIM Mitjà. 2015. Disponible a: studyres.es/doc
- Köneman I, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnòstic Microbiològic. 5ta ed. Editorial Panamericana SA Argentina.