FROTIS SANGUINI: CARACTERÍSTIQUES, TIPUS, TÈCNIQUES I HISTOLOGIA - BIOLOGIA - 2025

El frotis sanguini és un estès de sang perifèrica que serveix per analitzar els components presents en la circulació sanguínia. L'observació d'un frotis sanguini proporciona dades hematològics que són molt útils per al diagnòstic i seguiment de moltes patologies.

El frotis sanguini permet quantificar el nombre dels diferents tipus de glòbuls blancs (fórmula leucocitària), així com també permet l'anàlisi de la morfologia i la forma d'eritròcits, leucòcits i plaquetes.

Elaboració de l'frotis sanguini. Font: Sang en un vidre de laboratori. Public DomainPictures.net

S'hi poden detectar anormalitats en la quantitat de les cèl·lules, com ara: leucocitosi o leucopènies, limfocitosi o limfopènia, neutrofília o neutropènia, trombocitosi o trombocitopènies i eosinofília. També poden observar-anormalitats en la forma i en la mida de les cèl·lules.

Addicionalment, és possible detectar diversos tipus d'anèmies, leucèmies i infeccions bacterianes o per paràsits hemàtics.

Per a això existeixen diversos tipus de frotis que es realitzen depenent de l'propòsit de l'estudi. Hi frotis de gota fina i frotis de gota grossa. Aquests frotis difereixen en la tècnica d'execució i en la finalitat de l'estudi.

Els de gota fina s'utilitzen com a complement de l'hematologia completa. Aquest proporciona les dades de la fórmula leucocitària, a més de l'anàlisi de la forma i morfologia de les tres sèries cel·lulars que conformen la sang: sèrie vermella, sèrie blanca i plaquetes. Encara que també serveixen com a complement de l'estudi de la gota grossa.

La gota grossa s'utilitza per al diagnòstic de malalties causades per hemoparásitos, com la malària o paludisme, toxoplasmosi, leishmaniosi, malaltia de Chagas, babesiosis i microfilariasis.

Característiques d'un frotis sanguini

Un bon frotis sanguini ha de complir certes característiques. Entre elles es poden esmentar:

-La mostra ha de complir les exigències mínimes de qualitat perquè sigui representativa.

-La presa de mostra ha de ser ben executada.

-Execució oportuna de l'frotis.

-Si es realitza amb sang venosa, fer servir un anticoagulant que no deformi les cèl·lules i barrejar el tub abans de fer el frotis.

-Si es fa amb sang capil·lar descartar la primera gota.

-El estès ha de ser homogeni. Això garanteix que les cèl·lules es distribueixin uniformement i que es pugui fer una bona anàlisi de les cèl·lules sanguínies, quant a forma i nombre.

-Els laterals de l'frotis han de ser llisos de principi a fi.

-El frotis ha de respectar un marge d'1 a 2 mm als laterals de l'portaobjectes.

-La capa d'estesa ha d'anar disminuint el seu gruix de mica en mica des de l'inici cap al final (frotis de gota fina pel mètode de portaobjectes).

-Ha d'estar adequadament retolat per evitar confusions de mostres.

-Fixar i tenyir adequadament per a l'observació nítida dels elements sanguinis.

-Deixar assecar molt bé el frotis abans de muntar la preparació a l'microscopi. La col·locació d'oli d'immersió sobre un frotis mullat ocasionarà la formació de micel·les que impedeixen l'observació de les cèl·lules.

Tipus de frotis sanguini

Els frotis de sang perifèrica es poden classificar en frotis de gota fina i frotis de gota grossa. Els de capa fina són utilitzats per a l'estudi de la fórmula leucocitària i observació morfològica de les cèl·lules sanguínies. També es poden veure bacteris extracel·lulars com les borrèlies i hemoparásitos intracel·lulars, com el plasmodium, entre d'altres.

A la gota fina es pot identificar l'espècie de el paràsit, per tant, és una tècnica més específica que la gota grossa, però la gota grossa és més sensible, ja que és una tècnica de concentració utilitzada per a la recerca exhaustiva de hemoparásitos extracel·lulars.

Hi ha dos tipus de frotis de gota fina: els que es realitzen en làmines portaobjectes i els que es realitzen en làmines cobreobjectes. Els de gota grossa es realitzen en portaobjectes.

Tècniques per a la presa de mostra sanguínia

Els frotis sanguinis es poden realitzar a partir d'una punció capil·lar o d'una presa de mostra venosa amb anticoagulant. Si es realitza a partir de sang amb anticoagulant es pot preparar el frotis fins a 2 hores després d'haver pres la mostra.

S'ha de tenir la precaució d'usar anticoagulants que no deformin les cèl·lules sanguínies. La millor opció és l'EDTA. Per contra s'ha d'evitar l'ús d'anticoagulants com el citrat trisòdic.

Si la mostra es pren per punció capil·lar s'ha de fer l'extensió de l'frotis de forma immediata, abans que es coaguli la sang.

S'ha de descartar la primera gota, deixant que la següent surti espontàniament per evitar la dilució de la mostra amb el líquid tissular. És la tècnica més recomanable per a l'observació de morfologia cel·lular, ja que la sang no té cap additiu.

Per a l'observació de hemoparásitos, Solari i col·laboradors van concloure en el seu treball de recerca que ambdues tècniques (venopunció i capil·lar) són igual d'eficients.

Tipus de presa de mostra sanguínia: A. Punció capil·lar. B. Punció venosa. Font: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Tècniques per a l'elaboració de l'frotis sanguini

El frotis sanguini pot realitzar manualment en làmines portaobjectes o en làmines cobreobjectes o làmina. També és possible a través d'equips automatitzats.

-Frotis en portaobjectes

És la tècnica preferida per la majoria dels laboratoris per la seva fàcil manipulació.

Amb una pipeta Pasteur, es col·loca una gota de sang no molt gruixuda, ni molt fina, al centre d'un dels extrems d'una làmina portaobjeto neta.

Amb ajuda d'un altre portaobjeto amb un extrem esmerilat es realitza el frotis. El portaobjeto esmerilat es col·loca perpendicularment a l'extrem contrari d'on es troba la gota.

S'inclina fins a formar un angle entre 30 - 45 ° i llisca cap a la gota; a l'tocar-aquesta s'expandeix linealment sobre la vora de l'portaobjeto esmerilat i amb un moviment constant i definit es torna la làmina; abans d'arribar a la fin s'aixeca el portaobjeto.

D'aquesta manera queda estesa una capa homogènia sobre la superfície de l'portaobjeto receptor.

Es deixa assecar el frotis. Després es fixa i es tenyeix amb la tinció de preferència. Es deixa assecar bé abans d'observar a l'microscopi. Es col·loca una gota d'oli sobre la cara que presenta l'estès i s'observa a l'microscopi òptic.

Frotis sanguinis en làmina portaobjectes. Imatge superior: frotis sense tenyir. Imatge inferior: frotis tenyit. Font: Coinmac

Parts de l'frotis realitzat en portaobjectes

En aquest tipus de frotis es poden distingir tres zones definides: el cap, el cos i la cua. El cap correspon a la zona d'on parteix el frotis, és la zona més gruixuda i no és bona per observar.

El cos és la part central o intermèdia de l'frotis, és la millor zona per observar a l'microscopi, ja que allà les cèl·lules estan uniformement distribuïdes i la seva morfologia està conservada.

La cua correspon a la part final de l'frotis; aquí la distribució ja no és uniforme i tendeix a perdre la morfologia dels eritròcits.

Control de qualitat en la tècnica de l'portaobjeto

En aquesta tècnica té un paper fonamental:

-La neteja i desgreixatge de l'portaobjeto: garanteix el bon lliscament de la mostra.

-El mida de la gota: amb gotes molt grans s'obtindrà un estès més gruixut i llarg, amb una gota molt petita l'estesa serà més curt i extremadament fi.

-La velocitat que s'apliqui en l'extensió: a menor velocitat el frotis serà més fi, a major velocitat aquest serà més gruixut.

-El angle d'execució: a menor angle més fi serà el frotis, a major angle serà més gruixut.

-Frotis en cobreobjectes

No és molt utilitzada per ser enutjosa la manipulació dels fràgils cobreobjectes, però ofereix grans avantatges, ja que s'obté una millor distribució de les cèl·lules en tot el frotis.

Es col·loca una gota no gaire gruixuda, ni molt fina, al centre d'un cobreobjectes. Immediatament es col·loca un altre cobreobjectes sobre d'aquest de tal manera que les puntes de tots dos cobreobjectes sobresurtin, formant una estrella.

La gota es disseminarà espontàniament sobre la superfície de tots dos cobreobjectes. A l'culminar l'extensió llisca cada làmina a la banda contrària una de l'altra (una cap a la dreta i l'altra cap a l'esquerra) de forma ràpida.

La tècnica proporciona dos frotis en lloc d'un.

Es col·loquen a assecar amb la cara de l'estès cap amunt. Un cop seca, es fixa i es tenyeix amb la tècnica de preferència. Es deixa assecar. Es col·loca una gota d'oli d'immersió en una làmina portaobjeto, es col·loca el frotis amb la cara de l'estesa cap avall i s'observa a microscopi.

Control de qualitat en la tècnica de l'cobreobjectes

Per obtenir un bon frotis per aquesta tècnica és important:

-La neteja dels cobreobjectes (ajuda a la bona lliscament de la mostra).

-El mida de la gota (influeix en el gruix de l'estès).

-La velocitat amb la qual se separen els cobreobjectes (influeix en l'homogeneïtat de l'estès).

-Amb equips automatitzats

Es poden realitzar a través de qualsevol d'aquests equips: Spinner i Autoslide.

El Spinner consisteix a col·locar un portaobjeto amb una gota de sang sobre un plat de centrifugació especial. La mostra és centrifugada a altes velocitats; d'aquesta manera es forma un estès homogeni i fi de la mostra. Té com a desavantatge la possibilitat que ocorri hemòlisi de la mostra.

El Autoslide és un instrument que realitza de forma mecànica dels moviments per a l'execució de l'frotis en portaobjectes. A més pot fixar i tenyir el frotis. Fins i tot pot adaptar-se a alguns comptadors hematològics automàtics.

Tècnica de l'frotis de gota grossa

Per a la recerca de hemoparásitos es recomana fer dos frotis: un amb gota fina i un amb gota grossa.

Realitzar una punció capil·lar, netejar la primera gota. Posar una gota fina en un portaobjectes i fer el frotis com ja va ser explicat anteriorment. Per a la gota grossa col·loqui una gota gran en un altre portaobjectes i s'estengui en forma d'un quadrat de 1,55 mm. Deixar assecar els dos frotis.

Tinció dels frotis

Per als de gota fina es poden usar les tincions de Giemsa o Wright, entre d'altres. Per a la gota grossa es recomana la tinció de Giemsa o Mai-Grunwald Giemsa.

Tinció de Giemsa

Es fixa el frotis per 3 minuts amb metanol, s'escorre i es deixa assecar novament. Després es cobreix el frotis amb la tinció de Giemsa per 10-15 minuts. Es renta amb aigua destil·lada i es deixa assecar. Per observar a el microscopi es col·loca una gota d'oli d'immersió.

Tinció de Wright

Es cobreix el frotis amb el colorant de Wright per 5 minuts. Descartar i col·locar la solució buffer a pH de 6, 8 per 6 minuts. Bufar la preparació per a homogeneïtzar. Rentar amb aigua destil·lada i deixar assecar. Observar a l'microscopi.

Tipus de frotis defectuosos

Ocorre en aprenents en la tècnica de gota fina amb portaobjectes.

Frotis amb zones de diferents gruixos (fins i gruixos intercalats)

És pel fet que el moviment executat no va ser constant durant el estès, fent parades i reinicis.

Frotis amb estesos molt curts

Tenen 2 causes: un es deu al fet que s'ha aixecat el portaobjeto esmerilat abans d'arribar a l'altre extrem de la làmina. En aquest cas queda summament gruixut i curt.

D'altra banda, si el frotis és curt però prim, és a causa de que la mida de la gota era molt petita.

Frotis amb una zona rastellada cap al final de l'frotis

Presenta diverses causes: una és que el cant esmerilat sigui defectuós, que s'augmenti la pressió exercida sobre el portaobjeto receptor a l'hora de culminar l'estès o que el cant esmerilat de l'portaobjeto estigui gastat.

Frotis amb formació de vacúols o zones arrodonides o el·líptiques clares

Es deuen a la utilització de frotis grassos (mal rentats i desgreixats).

Frotis molt gruixuts o molt fins

Gotes massa grans generaran frotis molt gruixuts de principi a fi i gotes molt petites frotis molt fins.

histologia

En un frotis de sang es poden observar les cèl·lules de la sang. Entre elles es troben:

-Eritrocitos o glòbuls vermells

Sang humana, eritròcits o glòbuls vermells i dues glòbuls blancs. Presa i editada de: Viascos.El seu observació és molt important. A aquest nivell es poden detectar problemes d'anèmies, talassèmies, malaltia de la medul·la òssia, etc.

El nombre d'eritròcits o glòbuls vermells és aproximadament de 5 x 10 ⁶ mm3 en l'home i de 4,5 x 10 ⁶ en la dona. Els glòbuls vermells tenen forma de discos bicóncavos, amb una pal·lidesa central fisiològica. Poden observar-se separadament (normal) o formant apilaments en rouleaux (anormal).

En els frotis també pot observar-se la presència de poiquilocitosis (eritròcits de diverses formes), anisocitosis (eritròcits de diverses mides), anisopoiquilocitosis (diverses formes i mides), anisocromía (diferents colors), eritroblastos (eritròcits immadurs), microcitosi (eritròcits més petits) i macrocitos (eritròcits més grans).

Quan presenten deficiència en la quantitat d'hemoglobina i la pal·lidesa central augmenta es diu que hi ha hipocromia. Quan s'observa una sèrie vermella normal, aquesta es reportarà com normocítica i normocrómica.

-Glóbulos blancs o leucòcits

glòbuls blancs

La quantitat normal oscil·la entre 5.000 a 10.000 mm ³. Es alteren en processos infecciosos, en al·lèrgies i en la leucèmia. En el frotis sanguini es poden distingir diversos tipus que s'expliquen a continuació.

segmentats neutròfils

Representen el 55-65% de l'total de leucòcits. Mesuren entre 10-15 micres. Posseeixen un nucli segmentat o lobulat que adopta diverses morfologies, d'allí que se li denominin polimorfonuclears.

Posseeixen abundants grànuls neutròfils en el seu citoplasma i alguns azurófilos. Augmenten en infeccions bacterianes (neutrofília), disminueixen en les infeccions virals (neutropènia).

Es poden observar anomalies morfològiques com pleocariocitosis (nucli hiper-segmentats), gaiatos (cèl·lules immadures) o macropolicitos (de forma ovalada i grans dimensions).

Altres alteracions:

-Granulaciones tòxiques

-Neutrófilos pseudo Pelger (el nucli no presenta lobulacions o són bilobulados).

-Cossos de Dohle: inclusions citoplasmàtiques de color blau fosc.

-Augment de la basofília citoplasmàtica.

-Vacuolas intracitoplasmàtics.

-Picnosis cel·lular (pèrdua dels ponts internucleares).

segmentats eosinòfils

Representen el 1-3% de l'total de glòbuls blancs. Mesuren de 9-10 micres. Es caracteritzen per la presència d'abundants grànuls citoplasmàtics acidòfiles i escassos azurófilos. El seu nucli presenta dues lobulacions. El seu nombre augmenta en les al·lèrgies i malalties d'origen parasitari.

segmentats basòfils

Són extremadament escassos, representen el 0-1% dels leucòcits. Mesuren 10- 12μm. El nucli sol ser de vores irregulars i pot ser bilobulat, però no s'observa causa de la gran quantitat de granulacions gruixudes basófilas en el seu citoplasma. Molt poques vegades pot observar basofília.

limfòcits

Són cèl·lules petites amb citoplasma basòfil, amb nucli, ben definit, rodó, amb cromatina condensada. El nucli abasta gairebé la totalitat de la cèl·lula. Representen el 26-40% dels leucòcits sanguinis. Augmenten en infeccions virals (limfocitosi). Es poden observar limfòcits reactius.

monòcits

Cèl·lules més grans que els limfòcits, amb més citoplasma i nucli ovalat de cromatina més laxa. Mesuren de 9-12μm. El citoplasma és abundant i se sol veure de color blau grisós pàl·lid amb les tècniques de coloració habituals. Entre les alteracions es poden observar monòcits vacuolados i monocitosis.

-Plaquetas

Mesuren entre 1.5-3 micres. La seva forma és rodona o ovalada. El valor normal oscil·la entre 150.000-350.000 plaquetes / mm3. Poden disminuir en algunes infeccions virals. No tenen nucli i es pinten de violeta. Es poden observar anormalitats en aquesta sèrie, com macroplaquetas o microplaquetas, trombocitosi o trombocitopènia, i fragments plaquetaris.

elements patològics

paràsits hemàtics

En els frotis sanguini poden observar hemoparásitos, com ara l'agent causal de l'paludisme o malària (paràsits de l'gènere Plasmodium). Per això és important que el frotis s'analitzi manualment, ja que els equips automatitzats passen desapercebuts aquesta troballa.

bacteris

En patologies com la febre recurrent o en la malaltia de Lyme és possible observar el seu agent causal. En aquest cas correspon a les espiroquetes Borrelia recurrenti ia la Borrelia burgdorferi en el frotis sanguini.

cèl·lules immadures

Els casos severs s'observen en les leucèmies, en les reaccions leucemoides i en la reacció leucoeritroblástica, entre d'altres. En les infeccions bacterianes pot haver lleugeres desviacions a l'esquerra (presència de gaiatos). També en algunes anèmies es poden observar eritroblastos.

referències

1. Sang i teixit hematopoètic. Disponible a: sld.cu
2. Gomez A, Cases M. 2014. Angel. Interpretació clínica de laboratori. 8va Edició. Editorial Mèdica Panamericana.
3. Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Plans Comptes A. Comparació de les densitats parasitàries en gota gruixuda de sang venosa versus digitopunción en el diagnòstic de Malària vivax. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140-143. Disponible a: scielo.org.
4. Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carles. Importància de l'estudi de l'frotis de sang perifèrica en ancians. Medisur 2017; 15 (3): 362-382. Disponible a: scielo.sld
5. Grinspan S. L'estudi de l'frotis de sang perifèrica. Educació mèdica contínua. Disponible a: bvs.hn/RMH