QUÈ ÉS LA TINCIÓ SIMPLE? CARACTERÍSTIQUES MÉS DESTACADES - BIOLOGIA - 2025

La tinció simple és un procediment de tinció ràpid i senzill en el qual s'empra un sol colorant, per això es denomina simple. S'utilitza principalment per determinar la morfologia i l'organització de les cèl·lules presents en una mostra.

Naturalment les cèl·lules no tenen color, de manera que cal fer-les visibles d'alguna manera quan s'observen al microscopi.

Cèl·lules de galtes humanes tenyides mitjançant tinció simple amb blau de metilè.

És important destacar que els colorants emprats en la tinció simple han de ser bàsics amb càrrega positiva (catiònics), perquè puguin unir-se espontàniament a la paret i al citoplasma cel·lular.

Aquestes estructures cel·lulars estan carregades negativament. Per això el colorant, carregat positivament, es veu atret per les cèl·lules i s'uneix a aquestes de manera espontània. Així, es pinten ràpidament totes les cèl·lules presents en una mostra.

Colorants emprats en la tinció simple

Hi ha diversos colorants bàsics que es poden usar en el laboratori de microbiologia. Els més emprats són:

- Blau de metilè.

- Violeta de vidre.

- Verd malaquita.

- Fucsina bàsica.

Tots aquests colorants funcionen bé en els bacteris perquè tenen ions de color (cromòfors) amb càrrega positiva (catiònics).

Els temps de tinció per a la majoria d'aquests colorants són relativament curts. Generalment van dels 30 segons fins als 2 minuts, depenent de l'afinitat de el tint.

És important tenir en compte que abans de tenyir una mostra mitjançant tinció simple, aquesta ha de ser estesa i fixada a la làmina de vidre (portaobjeto); a la mostra estesa i fixada se l'anomena frotis.

Els 6 passos per realitzar una tinció simple

pas 1

Posar el portaobjectes sobre un prestatge de tinció i aplicar el colorant desitjat. Deixar actuar el temps corresponent.

Normalment la tinció simple triga uns segons o un parell de minuts, depenent de l'colorant emprat.

observació

En aquest pas és important no excedir-se de el temps recomanat per al colorant utilitzat, atès que podrien formar-vidres a la làmina, produint el que es coneix com a "artefactes" que distorsionen la morfologia de les cèl·lules.

pas 2

Rentar amb cura el frotis de l'portaobjectes amb aigua destil·lada d'una ampolla, o també amb aigua de l'aixeta que flueixi lentament, fins que el vessament es torni transparent. En general això triga de 5 a 10 segons.

observació

No aplicar el corrent d'aigua directament sobre el frotis, per evitar que la força de la mateixa danyi la mostra.

Si no es compta amb aigua destil·lada, es pot utilitzar aigua de l'aixeta sense problema ja que no afectarà el resultat de la tinció.

pas 3

Assecar el portaobjectes amb tovalloles de paper absorbent en un sol sentit i sense fregar. Assegurar-se que la part inferior de l'portaobjeto quedi neta.

pas 4

Observar el frotis tenyit al microscopi. Començar pels objectius més llunyans per ubicar adequadament la zona que es vol observar amb més detall. Canviar d'objectiu per acostar-se cada vegada més a la mostra.

observació

Per a l'ocupació de l'objectiu amb major augment (normalment 100X) s'ha d'utilitzar oli d'immersió, ja que aquest ajuda a que la llum penetri millor i que la imatge es vegi més nítida. No cal utilitzar un cobreobjectes.

pas 5

Finalment, rebutjar totes les mostres en un contenidor apropiat que estigui degudament retolat com "risc biològic".

referències

1. (2001). Microbiological Applications: Laboratory Manual in General Microbiology (8 ^th ed.). The McGraw-Hill Companies.
2. Harisha, S. (2006). An Introduction to Practical Biotechnology (1 ^st). Firewall Mitjana.
3. Moyes, RB, Reynolds, J., & Breakwell, DP (2009). Preliminary staining of bacteri: simple stains. Current Protocols in Microbiology, (Suppl. 15), 1-5.
4. Pommerville, J. (2013). Alcamo 's Laboratory Fundamentals of Microbiology (10 ^th). Jones & Bartlett Learning.
5. Prescott, H. (2002). Laboratory Exercises in Microbiology (5 ^th). The McGraw-Hill Companies.
6. Sumbali, G. & Mehrotra, R. (2009). Principles of Microbiology (1 ^st). Tata McGraw-Hill Education.