ROSA DE BENGALA: FONAMENT, PROCEDIMENT, CONTROL DE QUALITAT - MEDICINA - 2025

Rosa de bengala és una prova de laboratori basada en una reacció antigen anticòs per al diagnòstic de brucel·losi. La tècnica permet detectar anticossos específics en contra del bacteri Brucella abortus en mostres de sèrum humà. El resultat es pot reportar de forma qualitativa o semi-quantitativa.

La forma qualitativa expressa si el pacient està positiu o negatiu per a la prova, és a dir, si hi ha o no anticossos. Mentre, el reporti semi-quantitatiu es reporta en UI / ml i indica la quantitat aproximada d'anticossos presents. Cal destacar que, els anticossos només es produiran si el pacient ha estat en contacte amb el microorganisme.

Reacció de Rosa de Bengala en una placa d'aglutinació. Font: pres de el vídeo

Per la seva gran senzillesa, alta sensibilitat i especificitat, es tracta d'una de les tècniques de seroaglutinació més utilitzada en medicina com a prova inicial per al diagnòstic d'aquesta malaltia.

Alguns investigadors han comparat l'eficàcia de la prova Rosa de Bengala amb altres tècniques, com ara la seroaglutinació (antígens febrils) i han observat que encara hi ha bona correlació, van veure casos aïllats en què la prova d'antígens febrils donava negativa i Rosa de Bengala positiva.

La diferència obtinguda es va deure al fet que aquests pacients presentaven una subclasse d'anticossos IgG en contra de Brucella abortus amb millor capacitat aglutinant a pH àcid, per tant podien reaccionar amb el reactiu Rosa de Bengala però no amb el d'antígens febrils.

En aquest sentit, han suggerit que els reactius de la tècnica d'antígens febrils es modifiqui a un pH àcid perquè puguin detectar aquest tipus de casos.

fonament

El reactiu de Rosa de Bengala consisteix en una suspensió antigènica. La mateixa està constituïda per la soca S99 de Brucella abortus, diluïda en un tampó àcid de lactat (pH 3,6), més fenol i el colorant Rosa de Bengala.

Per tant, a la mostra el que es busca són els anticossos anti-Brucella, si aquests estan presents reaccionaran amb l'antigen de l'reactiu i s'observarà una reacció d'aglutinació macroscòpicament visible. El test detecta indistintament anticossos IgM o anticossos IgG.

Això vol dir que, pot detectar la malaltia tant en la seva etapa aguda on prevalen els anticossos IgM o en la seva etapa crònica on predominen els anticossos IgG.

Això representa un avantatge ja que augmenta la sensibilitat de la prova però alhora és un desavantatge ja que no discrimina entre una etapa i una altra, pel fet que la reacció amb anticossos IgM i IgG són idèntiques.

El test ha de sempre realitzar al costat d'un control negatiu i un control positiu. El control negatiu conté sèrum animal sense anticossos i el control positiu conté sèrum d'origen animal amb 50 UI / ml d'anticossos anti-Brucella.

ús

La brucel·losi és una malaltia greu que tendeix a ser crònica i perillosa, per això és molt important que es diagnostiqui a temps. És una zoonosi i l'humà pot infectar per contacte directe amb material contaminat, sent les persones més vulnerables els veterinaris i cuidadors d'animals.

També es pot produir la infecció per consum de carns crues infectades, entre altres formes de contagi.

Aquesta malaltia ataca de manera local o sistèmica. La forma sistèmica és la més greu, ja que diversos òrgans poden ser afectats, entre ells, el sistema reticle endotelial (fetge, melsa, medul·la òssia), pell (cel·lulitis i limfadenopatia), sistema respiratori (pneumònia), sistema musculoesquelètic (artritis, sacroileítis i espondilitis), entre d'altres.

La prova de Rosa de Bengala és una tècnica molt útil per realitzar un despistatge inicial, pel fet que és molt econòmica, fàcil d'usar i amb una gran especificitat i sensibilitat.

Els casos de falsos negatius i falsos positius són molt escassos, podent ocórrer en persones amb títols d'anticossos molt baixos (<25 UI / ml) o extremadament alts (> 1000 UI / ml) respectivament.

procediment

materials

Kit Rosa de Bengala

-Placa d'aglutinació fons blanc

-Pipeta de 50 ml

-Rotador (opcional)

-Vortex

Tècnica (mètode qualitatiu)

Els kits comercials de Rosa de Bengala vénen amb reactius llestos per al seu ús.

-Atempere els reactius abans de començar a treballar.

-Les plaques d'aglutinació tenen uns cercles dibuixats, sent cada un per a una mostra diferent. Utilitzeu 3 cercles, el primer per al control negatiu, el segon per a la mostra i el tercer per al control positiu.

-Col loqueu una gota o 50 ml dels controls i de la mostra en el seu cercle corresponent.

-Mezcle el reactiu de Rosa de Bengala utilitzant un vortex. Col·loqui una gota a la banda de les anteriorment col·locades.

-Mezcle amb escuradents de fusta (usi un per a cada espècimen o control). Feu moviments circulars i s'estén de manera que abasti tot el cercle.

Font: imatges preses de l'Vídeo: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Disseny de la imatge editada.

-Col·locar la placa en un rotador automàtic de 80 a 100 RPM o rote manualment per 4 minuts. Llegir la prova a l'culminar aquest temps.

-Verificar que els controls van donar acord amb el que s'esperava. Comparar la reacció de la mostra problema amb els controls. Informar com a positiu si s'observa aglutinació i com negatiu si no hi ha aglutinació.

Una prova positiva indica que el pacient posseeix una quantitat igual o major de 25 UI / ml d'anticossos anti-Brucella.

Interpretació d'una reacció positiva (amb aglutinació) i negativa (sense aglutinació). Font: Citrul·lina. Imatge editada.

Tècnica (semi-quantitativa)

Si en la reacció qualitativa la mostra resulta fortament positiva, es pot semi-quantificar. Per a això es realitzen dilucions doble seriades de la mostra amb solució salina fisiològica. Amb cada dilució es realitza el procediment anteriorment descrit.

S'interpreta igualment observant l'aglutinació de forma macroscòpica. El resultat serà el títol de la major dilució en la qual es va observar un resultat positiu.

Per calcular el valor aproximat d'anticossos anti-Brucella s'utilitza la següent fórmula:

25 UI / ml x títol de la reacció = UI / ml

Exemple, si un pacient en la prova semi-quantitativa dóna positiva en la dilució ½, ¼ i 1/8 i comença a ser negativa a partir de la dilució 1/16 en endavant, això vol dir que el pacient té un títol de 8.

Aplicant la fórmula:

25 UI / ml x 8 = 200 UI / ml

Control de qualitat

-Els kits presenten una data de caducitat i la mateixa s'ha de respectar. No s'ha de fer servir si el reactiu està vençut.

-Durant el seu ús, observar que el reactiu no contingui partícules sòlides, ja que això és signe de deteriorament.

-Conservar entre 2 i 8 ° C.

-No congelar, aquest acte danya el reactiu irremeiablement.

-Sempre realitzar la prova juntament amb els controls negatiu i positiu.

-La tècnica tolera mostres de sèrum amb cert grau de lipèmia i hemòlisi, però no és recomanable utilitzar sèrums exageradament lipémicos i hemolizados, ambdues condicions alteren els resultats de la prova.

-Sempre temperi els reactius a temperatura d'ambient abans de començar l'anàlisi.

-No interpretar reaccions que tenen més de el temps recomanat, ja que això genera el report de falsos positius, ja que després de cert temps el reactiu precipita, simulant una reacció positiva.

-La tècnica és 100% sensible i té una especificitat de 98%.

-Després d'una semi-quantificació de 1000 UI / ml hi ha possibilitat d'observar efecte prozona (fals negatiu per excés d'anticòs en comparació a la quantitat d'antígens).

referències

1. Rubio M, Barri B i Díaz R. Valor de les proves de Rosa de Bengala, Coombs i contrainmunoelectroforesis per diagnosticar els casos de brucel·losi humana en què la seroaglutinació és negativa. Departament de Microbiologia. Servei de Microbiologia Clínica. Clínica Universitària. Universitat de Navarra. 406-407. Disponible a: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
2. «Brucel·losi.» Viquipèdia L'enciclopèdia lliure. 6 desembre 2019, 14:37 UTC. 18 desembre 2019, 18:09 es.wikipedia.org.
3. Laboratoris Monlab. Rosa de bengala Monlab - test. 2016. Disponible a: monlab.es/
4. Carrillo C, Gotuzzo E. brucellosis. Rev. Perú. Med. Exp. Salut Pública 1997; 14 (1): 63-66. Disponible a: scielo.org
5. Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Seguiment clínic, serològic i mitjançant la reacció de polimerasa en cadena d'una família amb brucel·losi. Rev. chil. Infectol. 2014; 31 (4): 425-433. Disponible a: scielo.conicyt.