TINCIÓ DE KINYOUN: FONAMENT I TÈCNIQUES - BIOLOGIA - 2024

La tinció Kinyoun és una tècnica de coloració utilitzada per tenyir bacteris i paràsits àcid alcohol resistents. Va néixer de la modificació de la coloració de Ziehl-Neelsen; ambdues tècniques s'interpreten de la mateixa manera però es diferencien en dos elements: en la preparació de l'reactiu principal i en què la tècnica de Kinyoun no utilitza calor.

Per aquesta raó també és coneguda com Ziehl-Neelsen modificada en fred o tinció en fred de Kinyoun. Aquesta indicada per a la coloració de Micobacterium tuberculosi, Micobacterium leprae, micobacteris atípics, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris i Cyclosporas cayetanensis.

Cryptosporidium parvum tenyit amb tinció de Kinyoun. Punlop Anusonpornperm, from Wikimedia Commons

Val fitar que les Nocardias es tenyeixen dèbilment amb aquesta tècnica atès que són parcialment àcid alcohol resistents, de manera que per aquest gènere hi ha una modificació de la metodologia.

Al seu torn, s'ha combinat la tècnica de Kinyoun a el fred amb la tècnica tricrómica modificada per Didier per a la detecció de coccidis (Cryptosporidium parvum i Isospora belli) i espores de microsporidios (Enterocytozoon bieneusi i Encephalitozoon intestinalis).

fonament

El reactiu principal de la tinció és la carbolfucsina o fucsina fenicada, que té la propietat d'unir-se als àcids carbólicos existents dins de la paret cel·lular cèria, rica en lípids (àcids micòlics) dels micobacteris i certs paràsits.

Aquesta unió no és contrarestada pel decolorant àcid; per això, els microorganismes es defineixen com a àcid alcohol resistents.

A diferència de la tècnica de Ziehl-Neelsen -que fixa el colorant a través d'la calor-, en la tècnica de Kinyoun aquest pas no és necessari, ja que la solució de fucsina fenicada que es prepara per a aquesta tècnica conté alta concentració de fenol.

El fenol dissol el material lipídic de la paret cel·lular, el que permet l'entrada de el colorant carbolfucsina. Després que el colorant penetra, es queda fix malgrat el rentat amb l'alcohol-àcid.

D'aquesta manera els microorganismes àcid alcohol resistents prenen el característic color vermell, mentre que tot el que no és àcid alcohol resistent es decolora i es tenyeix de blau.

tècnica

materials

- Fucsina fenicada modificada.

- Alcohol -àcid.

- Blau de metilè.

Preparació de la fucsina fenicada de Kinyoun

- Fucsina bàsica: 4 g.

- Fenol: 8 ml.

- Alcohol (95%): 20 ml.

- Aigua destil·lada: 100 ml.

S'ha de dissoldre lentament la fucsina bàsica en l'alcohol, barrejant constantment. Posteriorment es fon el fenol cristal·litzat en un bany Maria a 56 ° C. Un cop dissolt, s'agreguen 8 ml a la solució de fucsina preparada anteriorment.

Preparació de l'alcohol-àcid

- Àcid clorhídric concentrat: 3 ml.

- Etanol (95%): 97 ml.

S'ha de mesurar, unir i barrejar.

Preparació de l'colorant de contrast blau de metilè

- Blau de metilè: 0.3 g.

- Aigua destil·lada: 100 ml.

Es pesa i es dissol.

Tècnica de la tinció de Kinyoun

1- Preparar un frotis directament de la mostra, que pot ser esput, fluid pulmonar, sediment d'orina, líquid cefaloraquidi o excrements, entre d'altres; oa partir d'una suspensió de microorganismes obtinguts de colònies pures desenvolupades en mitjans de cultius primaris.

2- Fixar el frotis amb calor.

3- Posar el frotis sobre el pont de coloració i cobrir amb el reactiu de fucsina fenicada de Kinyoun preparat. Es deixa reposar durant 3 o 5 minuts.

4- Rentar amb aigua destil·lada.

5- Decolorar amb alcohol àcid durant 3 minuts i rentar novament amb aigua destil·lada.

6- Decolorar novament amb alcohol àcid durant 1 o 2 minuts fins que no arrossegui més colorant.

7- Rentar amb aigua destil·lada i deixar escórrer, col·locant el portaobjectes en posició vertical.

8- Cobrir la preparació amb blau de metilè i deixar actuar per 4 minuts.

9- Rentar amb aigua destil·lada i deixar assecar a l'aire.

10- Navega a 40X i després a 100X.

Si vol millorar-se i accelerar-la tinció dels microorganismes àcid alcohol resistents, s'agrega 1 gota d'un agent humectant (com el tergitol N ° 7) a 30 o 40 ml d'fucsina fenicada de Kinyoun.

Alguns laboratoris canvien el colorant de contrast blau de metilè per verd brillant o àcid pícric; el primer atorga un color verd a el fons i el segon genera un color groc.

Tècnica de Kinyoun especial per Nocardias

Per millorar la tinció dels bacteris de l'gènere Nocardia s'usa una modificació de la tinció de Kinyoun. La tècnica és la següent:

1- Cobrir el frotis amb fucsina fenicada de Kinyoun per 3 minuts.

2- Rentar amb aigua destil·lada.

3- Decolorar breument amb alcohol àcid preparat a el 3% fins que no arrossegui més colorant.

4- Rentar novament amb aigua destil·lada.

5- Cobrir la preparació amb blau de metilè i deixar actuar per 30 segons.

6- Rentar amb aigua destil·lada i deixar assecar a l'aire.

Tècnica combinada de fucsina fenicada i tricrómica modificada per Didier

Aquesta tècnica es recomana per a l'anàlisi de mostres de femta a la recerca de coccidis i espores de Microsporidium sp a el mateix temps. El procediment a seguir és el següent:

1- Cobrir el frotis amb fucsina fenicada de Kinyoun durant 10 minuts.

2- Retirar el colorant i rentar amb aigua destil·lada.

3- Decolorar per 30 segons amb alcohol àcid clorhídric.

4- Rentar novament amb aigua destil·lada.

5- Cobrir el frotis amb solució tricrómica per 30 minuts a 37 ° C.

6- Rentar amb aigua destil·lada.

7- Decolorar per 10 segons amb alcohol àcid acètic.

8- Rentar el frotis durant 30 segons usant etanol a el 95%.

Control de qualitat

Com a control positiu es preparen frotis amb ceps de Micobacterium tuberculosi i es tenyeixen amb els reactius preparats per verificar que els bacteris prenguin el color adequat (vermell-fúcsia).

També es poden usar controls negatius preparant frotis amb qualsevol soca que no sigui àcid alcohol resistent, verificant així que tota la mostra prengui el color de contrast.

Tècnica de Kinyoun en comparació amb la tècnica de Ziehl -Neelsen

La tècnica de Kinyoun és més senzilla atès que elimina el pas de l'escalfament, però el seu avantatge principal és que evita l'emissió de vapors, altament tòxics i causants de càncer a llarg termini. Per tant, la tinció de Kinyoun és més segura per al personal encarregat de realitzar les tincions.

És important tenir en compte que cal tenir la precaució que els reactius no entrin en contacte directe amb la pell, ja que són corrosius i el decolorant és inflamable.

Quant als desavantatges, un frotis negatiu no indica necessàriament que el microorganisme no estigui present. A més, la presència de detritus cel·lulars pot originar falsos positius, el que genera confusió en el diagnòstic.

referència

1. Química Clínica Aplicada. (2016). BK Kinyoun Kit. Disponible a: cromakit.es
2. Orozco-Ric Miquel. Tinció Kinyoun i dues Coccidios en VIH. Revista Mèdica MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Diagnòstic Microbiològic de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
4. Köneman I, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnòstic Microbiològic. (5ta ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
5. Wikipedia contributors. «Kinyoun stain.» Viquipèdia The Free Encyclopedia. Viquipèdia The Free Encyclopedia, 8 feb 2018. web. 5 Jan. 2019.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo I, Acuña A, Zanetta E. Implementació d'una tècnica de coloració per al diagnòstic simultani de Coccidios i microsporidios. Institut d'Higiene de la Universitat de la República. Montevideo. Uruguai. Disponible a: higiene.edu.uy