BROU TIOGLICOLAT: FONAMENT, PREPARACIÓ I USOS - BIOLOGIA - 2025

El brou tioglicolat és un mitjà de cultiu enriquit de consistència fluida. Se li coneix amb les sigles FTM per les seves sigles en anglès Fluid Thioglycollate Medium. Va ser creat per Brewer i modificat el 1944 per Vera, qui li va incorporar peptona de caseïna.

Aquest mitjà té un baix potencial d'oxidació -reducció, per això no és recomanable per al desenvolupament de bacteris aerobis estrictes, però és ideal per recuperar bacteris aeròbics facultatives, anaerobis estrictes i microaerófilas poc exigents.

Caldo tioglicolat sense indicador. Mostra secreció vaginal. Font: Bobjgalindo

L'alt rendiment observat amb aquest mitjà a l'aïllament i recuperació d'una àmplia varietat de microorganismes, ha fet que sigui acceptada per la Farmacopea d'Estats Units (USP), per l'Associació Oficial de Químics Agrícoles (AOAC) i per la Farmacopea Europea (EP).

Aquestes organitzacions el recomanen per a les proves de control d'esterilitat de productes farmacèutics i per a l'enriquiment de diversos tipus de mostres.

El cat tioglicolat està compost per extracte de llevat, digerit pancreàtic de caseïna, dextrosa anhidre, L-cistina, clorur de sòdic, tioglicolat sòdic, resazurina i agar en petita quantitat.

Existeixen diverses versions d'aquest mitjà, entre elles estan: brou tioglicolat amb indicador, brou tioglicolat sense indicador, brou tioglicolat amb indicador enriquit amb hemina i vitamina K _1, i brou tioglicolat amb carbonat càlcic.

Cal destacar que la variant de brou tioglicolat enriquida amb hemina i vitamina K serveix per millorar el creixement de anaerobis estrictes exigents, i la variant de brou tioglicolat que conté carbonat càlcic és útil per contrarestar els àcids produïts durant el creixement microbià.

fonament

El brou tioglicolat es considera un mitjà d'enriquiment, no selectiu ja que permet el desenvolupament de la majoria dels bacteris no exigents. Els requeriments nutricionals són proporcionats per l'extracte de llevat, el digerit pancreàtic i la glucosa.

D'altra banda, aquest mitjà tot i ser un brou conté una petita quantitat d'agar; això fa que tingui un baix potencial d'òxid-reducció, pel fet que frena l'entrada d'oxigen, de manera que l'oxigen va disminuint a mesura que s'aprofundeix cap a l'interior de l'tub.

És per això que aquest mitjà és ideal per al desenvolupament de bacteris aerobis facultatives, microaerofilas i anaerobis estrictes, aquestes 2 últimes sense necessitat d'incubar sota aquestes condicions. El mateix mitjà regula la quantitat d'oxigen dins de l'mig, estant absent en el fons de l'tub i en quantitat suficient en la superfície.

Així mateix, el tioglicolat i la L-cistina actuen com a agents reductors, contribuint a la prevenció de l'acumulació de substàncies nocives per al desenvolupament bacterià, com ho és el peròxid. A més, aquests compostos contenen grups sulfidrilos (-SH-), neutralitzant els efectes inhibitoris dels derivats mercurials, arsenicals, entre d'altres metalls pesats.

Per la seva banda, la resazurina és un indicador d'òxid -reducció. Aquesta substància és incolora quan està reduïda i color rosa quan està rovellada. Existeixen les variants de brou tioglicolat amb indicador i sense indicador. El seu ús dependrà de l'tipus de mostra i la preferència de laboratori.

Mentrestant, el clorur de sodi manté l'equilibri osmòtic de l'brou tioglicolat i l'ús de la glucosa en forma anhidra prevé l'excés d'humitat en el medi deshidratat.

preparació

Brou tioglicolat amb indicador

Pesar 29,75 gr de el medi deshidratat i dissoldre en 1 litre d'aigua destil·lada. La barreja es deixa en repòs per 5 minuts aproximadament. Dur a una font de calor i agitar freqüentment fins que es dissolgui completament.

Abocar el medi en tubs d'assaigs i autoclavar a 121 ° C per 15 minuts. Deixar refredar abans d'utilitzar. Revisar l'insert de la casa comercial per a la seva conservació. Algunes recomanen guardar a temperatura ambient en lloc fosc, i altres en nevera protegits de la llum.

El pH de l'mig preparat és de 7,1 ± 0,2.

El color de l'mig deshidratat és beix clar i preparat és ambre clar amb certa opalescència.

Brou tioglicolat amb indicador enriquit amb hemina i vitamina K

Existeixen mitjans comercials que ja porten hemina i vitamina K ₁, especial per al cultiu de anaerobis.

Si no es compta amb el medi enriquit per anaerobis es pot preparar el brou tioglicolat bàsic. Per a això, s'addicionen 10 mg d'hidroclorur de hemina i 1 mg de vitamina K ₁ per cada litre de medi. No obstant això, si s'addiciona sang o sèrum a l'brou tioglicolat no cal l'addició de hemina, ni de vitamina K.

Brou tioglicolat amb carbonat càlcic

Ve comercialment i es prepara seguint les instruccions de l'insert.

Caldo tioglicolat sense indicador

Aquest posseeix la mateixa composició de l'tioglicolat bàsic, però no conté resazurina.

Pesar 30 g de medi deshidratat i dissoldre en un litre d'aigua destil·lada. La resta de la preparació és igual a la descrita en el brou tioglicolat amb indicador.

ús

El brou tioglicolat és útil per a l'enriquiment de mostres clíniques, especialment per a aquelles provinents de llocs estèrils. També és útil per a mostres no clíniques, com cosmètics, medicaments, etc.

Per a la inoculació de mostres líquides (com LCR, líquid sinovial, entre d'altres), primer es centrifuguen les mostres i després es prenen 2 gotes de el sediment i es col·loquen en el brou tioglicolat. Incubar a 35 ° C per 24 hores. Si en aquest temps no hi ha creixement (terbolesa), s'incuba fins a un màxim de 7 dies.

Si la mostra és presa amb hisop, primer s'inoculen els mitjans de cultiu en plaques i finalment s'introdueix el hisop en el brou, es parteix la porció que sobresurt i es tapa el tub, deixant el hisop dins. Es incuba a 35 ° C per 24 hores, 7 dies com a màxim.

Per a mostres sòlides, s'ha d'homogeneïtzar en solució salina fisiològica (SSF) i després inocular el brou tioglicolat amb 2 gotes de la suspensió.

En ocasions pot utilitzar com a mitjà de transport per a mostres on se sospita la presència de anaerobis estrictes o com brou d'enriquiment d'respatller.

La variant de brou tioglicolat amb carbonat càlcic s'usa per al manteniment de soques controls per més temps, a causa de que té la capacitat de neutralitzar els àcids produïts per la utilització de la glucosa; aquests àcids són tòxics per certs bacteris.

El creixement en el brou tioglicolat s'observarà per la terbolesa de l'mig. Es recomana realitzar una tinció de Gram i posteriorment subcultivar en mitjans no selectius i selectius, depenent de el tipus de mostra i dels microorganismes de el qual se sospiti.

Control de qualitat

Per al control d'esterilitat es recomana incubar un o dos brous sense inocular. El resultat esperat és un brou transparent, sense canvi de color, tot i que és normal que s'observi un lleuger color rosa a la superfície de l'tub.

Per al control de qualitat s'ha de inocular entre 10-100 UFC de ceps controls certificades, com ara Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 11437, Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Incubar a 30-35 ° C a aerobiosi per 24 hores fins a un màxim de 3 dies, ja que aquests microorganismes són de creixement ràpid.

En tots els casos s'espera un bon desenvolupament, llevat de Micrococcus luteus i Bacillus subtilis, on pot haver-hi un desenvolupament moderat.

Per al control de qualitat de l'brou tioglicolat enriquit amb hemina i vitamina K ₁, es poden fer servir els ceps control Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 i Bacteroides fragilis ATCC 25285. El resultat esperat és un creixement satisfactori.

recomanacions

-En ocasions es pot observar que la superfície de l'brou tioglicolat amb indicador es torna de color rosat; això es deu a l'oxidació de l'mig. Si el color rosat abasta un 30% o més de l'total de l'brou es pot escalfar en bany maria per 5 minuts, refredar-novament i utilitzar-se.

Això eliminarà l'oxigen absorbit, tornant el medi al seu color original. Aquest procediment només es pot fer una vegada.

-Per millorar el creixement de bacteris aerobis s'ha de incubar amb la tapa lleugerament fluixa. No obstant això, és preferible utilitzar per a aquest fi un brou d'infusió cervell cor o brou soja tripticasa per al bon desenvolupament dels aerobis estrictes.

-Es ha d'evitar la congelació de l'mitjà o el sobreescalfament, ja que totes dues condicions fan malbé el medi.

-La llum directa danya el medi de cultiu, s'ha de guardar protegit de la llum.

referències

1. Laboratoris Britània. Tioglicolat USP amb indicador. 2015. Disponible a: labBritania.com.
2. Laboratoris Quios Sas. 2019. Caldo tioglicolat. Disponible a: quios.com.co
3. Laboratoris BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. Disponible a: bd.com/Europe
4. Mitjans BBL preparats en tubs per al cultiu de microorganismes anaerobis. Mitjans de tioglicolat. 2013. Disponible a: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnòstic Microbiològic de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.