CAMBRA DE NEUBAUER: HISTÒRIA, CARACTERÍSTIQUES, USOS - BIOLOGIA - 2025

La càmera de Neubauer, hematímetro o hemocitómetro, és un instrument de laboratori que consisteix en una placa de vidre especial gruixut. Aquesta càmera serveix per fer recomptes d'alguns tipus cel·lulars com hematies, glòbuls blancs i plaquetes, encara que pot ser usat per recompte d'espores, espermatozous, paràsits, etc.

Presenta unes característiques molt peculiars, ja que consta de 3 zones, una central per al recompte i dues zones de suport. Cada càmera posseeix dues zones de recompte o reticles, una a la part superior i una altra a la part inferior.

Cambra de Neubauer. Font: SantiBadia. Imatge editada.

Aquests posseeixen múltiples divisions en forma quadriculada. Les zones de comptatge són els quadres mitjans que es troben en les 4 cantonades de tots dos reticles, més el quadrat central.

El muntatge de la càmera s'ha de fer amb molta cura, ja que qualsevol detall influeix en el comptatge de les cèl·lules. Són molts els errors que es poden cometre, però si algun d'ells passa s'ha de desmuntar la càmera, netejar i tornar a muntar. Entre els principals errors es poden esmentar els següents:

Vessar la càmera o realitzar un ompliment insuficient, deixar assecar la càmera, intentar treure l'excés de líquid amb gasa, inclinar la càmera a l'transportar-la, omplir una càmera bruta o mullada, no barrejar bé la dilució o la mostra, entre d'altres. Tots aquests errors donaran com a resultat un valor irreal.

història

La càmera de Neubauer és un instrument de precisió, i en el procés de fabricació passa per un estricte control de qualitat. Va ser creada per al recompte precís de partícules o elements formes per mm ³, com ara cèl·lules en diversos líquids. La seva delicada gràfica és tallat amb llapis de diamant.

Característiques de la càmera de Neubauer

La càmera completa és de la mida d'un portaobjeto normal perquè pugui ser col·locada a la platina de l'microscopi.

La càmera consta de tres superfícies rectangulars centrals (a, b, c). A la zona "b" està ubicada la zona R o zona de recompte, també anomenat reticle. Una a cada costat de la càmera, separats per la zona «d».

Esquema gràfic de la Cambra de Neubauer. Font: Guia pràctica d'Hematologia. Escola de Bioanàlisi de la Universitat de Carabobo, Veneçuela.

Cada reticle és una zona polida que conté gravada la zona de comptatge. Consta d'un quadrat amb una superfície de 9 mm ² i està dividit internament en 9 quadres amb 1 mm ² de superfície cada un. Els quatre quadres de les cantonades estan dividits en 16 quadrícules més petites (0.0625 mm ² de superfície).

Aquestes quadrícules es formen per una sèrie de línies mil·limetrades que s'entrecreuen entre si, constituint quadrícules perfectament graficades i delimitades a les mesures que s'han especificat. Aquestes línies han estat gravades amb punta de diamant.

Reticle de Neubauer millorat. Font: Guia pràctica d'Hematologia de l'Escola de Bioanàlisi de la Universitat de Carabobo, Veneçuela.

Els quatre laterals corresponen a la zona de recompte. En aquests laterals o cantons és on es realitza el comptatge de la majoria de les cèl·lules (hematies i leucòcits), mentre que les plaquetes es compten a la zona central.

La zona central té més divisions, consta d'un quadrat d'1 mm ² dividit en 25 quadres que tenen una superfície de 0,04 mm ² cadascun. Aquests al seu torn es divideixen en 16 quadrícules amb una superfície de 0,0025 mm ².

Descripció de l'reticle de Neubauer millorat. a) Quadrat de les cantonades, b) quadrat central, c) quadrat mitjà de el quadrat central. Font: Guia pràctica d'Hematologia de l'Escola de Bioanàlisi de la Universitat de Carabobo, Veneçuela.

La zona "a" i "c" serveixen de suport per col·locar un cobreix objecte especial que rep el nom de làmina hematimètrica o cobreix hematímetro.

L'alçada entre la làmina i la superfície de recompte és de 0,1 mm. Les mesures de la superfície dels quadres de comptatge, així com l'altura de la càmera i la dilució de la mostra, són dades necessàries per a realitzar els càlculs finals.

usos

S'utilitza per al comptatge de cèl·lules. Especialment és de gran ajuda en l'àrea de hematologia, ja que permet realitzar el comptatge de les 3 sèries cel·lulars sanguínies; és a dir glòbuls vermells, glòbuls blancs i plaquetes.

No obstant això, es pot usar en altres àrees, per exemple per explicar espermatozoides, espores, bacteris o altres elements d'importància depenent de el tipus de mostra.

Com es fa servir?

Preparació de la mostra

Per realitzar el recompte cel·lular, generalment es parteix d'una dilució prèvia. Exemple: per explicar glòbuls blancs es prepara una dilució 1:20 amb líquid de Turk. Es barreja bé la dilució abans de carregar la pipeta i muntar la càmera de Neubauer.

Hi ha ocasions en què una dilució 1:20 no és suficient per poder explicar. Per exemple, en pacients que pateixen certs tipus de leucèmies cròniques. En aquests casos s'han de fer dilucions més altes com 1: 100.

Si per contra el comptatge és molt baix, com en les leucopènies severes, es poden fer dilucions més petites per concentrar la mostra. Exemple: es pot fer una dilució 1:10.

Els canvis que es realitzin influeixen en els càlculs.

Muntatge de la càmera de Neubauer

La càmera de Neubauer s'arma col·locant a la zona central la làmina hematimètrica. Totes dues han d'estar molt netes i seques. Per col·locar la làmina aquesta, es pren per les vores i es deixa caure suaument sobre la càmera.

Aquesta s'omple col·locant la punta d'una pipeta automàtica o pipeta de Thoma en un angle de 35 ° en la vora de la zona de càrrega. Es va descarregant el líquid suaument i la zona de càrrega s'omple per capil·laritat. Això es realitza per ambdós costats per carregar els dos reticles.

No s'han de sobrecarregar els reticles i tampoc se'ls ha de negar líquid. La càrrega ha de quedar exacta. És important que l'ompliment es realitzi homogèniament, és a dir, no han de quedar bombolles.

Un cop muntada la càmera es deixa en repòs per 2 minuts perquè les cèl·lules precipitin a el fons i sigui més fàcil la seva visualització i recompte.

Passat el temps de repòs es munta a la platina de l'microscopi de llum per a la seva observació. Primer s'enfoca amb objectiu de 10X i si cal després es passa a 40X.

Per millorar la seva visualització es disminueix el pas de la llum de l'microscopi. Per a això es baixa el condensador i es tanca una mica el diafragma.

comptatge

Per al comptatge dels glòbuls blancs o leucòcits s'ha de comptar tota la superfície dels quatre quadrats mitjans dels cantons i el quadrat central de cada reticle.

El comptatge s'inicia al quadrat de la cantonada esquerra superior. Es comença des del primer quadrat de la primera fila, és a dir, d'esquerra a dreta fins arribar a l'extrem contrari.

Allà es baixa i es torna la mirada de dreta a esquerra fins arribar a l'altre extrem i així successivament es van explicant les cèl·lules que hi ha dins de cada quadrícula en forma de ziga-zaga. S'expliquen les 16 quadrícules de cada quadrat mitjà.

Per evitar explicar una cèl·lula dues vegades hi ha regles sobre les cèl·lules que se situen sobre les línies limítrofes de cada quadrícula. Les cèl·lules que s'ubiquen en les línies esquerres i superiors s'expliquen i les que s'ubiquen sobre les línies dretes i inferiors s'ignoren.

S'ha de disposar d'un comptador de cèl·lules manual perquè l'operador premeu la tecla de l'aparell tantes vegades com cèl·lules observi. Amb l'ús de l'comptador l'operador pot comptar sense necessitat d'aixecar la mirada d'el camp microscòpic. A l'acabar el comptatge d'observar el total de cèl·lules comptades.

càlculs

Per als càlculs es pot procedir de diverses maneres. Es pot comptar un sol reticle o es poden comptar els dos i es treu una mitjana de tots dos. En aquestes dues situacions les cèl·lules comptades s'han de multiplicar per un factor, que en aquest cas seria 40. I així s'obté el comptatge total per mm ³.

Però si es compten els dos reticles i no es treu mitjana s'ha de multiplicar per un factor diferent, en aquest cas per 20.

-Factor de multiplicació

A continuació s'explica com es calcula el factor de multiplicació.

Per als càlculs es pren en consideració diverses dades, entre ells el títol de la dilució, l'alçada de la càmera i la superfície explicada.

dilució

La dilució que s'utilitza de manera estàndard és 01:20 per al comptatge de leucòcits.

Alçada de la càmera

L'alçada entre la càmera i la làmina hematimètrica és de 0,1 mm.

superfície explicada

Si es compten 5 quadrats d'1 mm ² de superfície, vol dir que la superfície total de l'comptatge és de 5 mm ². Aquesta dada s'ha de multiplicar per l'altura de la càmera per obtenir el volum total comptat. És a dir, 5 mm ² x 0,1 mm = 0,5 mm ³.

Fórmules i càlculs

Amb les dades que es tenen es diu:

Si en 0,5 mm ³ --hi ha --- n ° de cèl·lules comptades

En 1 mm ³ --- hi haurà - X n ° de cèl·lules

X n ° de cèl·lules = (n ° de cèl·lules comptades x 1) / 0,5 mm ³

Però s'ha de prendre en compte també la dilució. Per tant, la fórmula queda de la següent manera:

(n ° de cèl·lules comptades x 1) x 20 / 0,5 mm ³

Finalment, per resumir es pot multiplicar el n ° de cèl·lules comptades per 40. Així s'obté el valor de leucòcits per mm ³.

En el cas que es comptin els dos reticles es canvia la dada de la superfície explicada que en aquest cas seria de 10 quadrats, és a dir de 10 mm ². I un volum total comptat d'1 mm3. La fórmula quedaria:

(n ° de cèl·lules comptades x 1) x 20/1 mm ³

Per tant, en aquest cas el factor de multiplicació seria 20.

errors

-Si a l'carregar la càmera aquesta queda depassada o sobrepassada de líquid, l'altura de la càmera variarà. Això porta com a conseqüència que el comptatge doni més alt de la realitat. Si s'intenta treure l'excés amb una gasa o cotó, això representa un error garrafal. Aquesta acció farà que les cèl·lules es concentrin, augmentant el comptatge.

-Si es carrega deficientment, el comptatge donarà per sota de la realitat.

-En cas que es munti la càmera i es deixi assecar, ja no és possible realitzar el comptatge causa que emetrà resultats erronis.

-Si abans de carregar la càmera no es barreja bé la dilució de la mostra, es corre el risc que existeixi error en la lectura, ja que les cèl·lules no estaran distribuïdes de forma homogènia. Per tant, hi haurà més o menys concentració de cèl·lules, depenent si la mostra és presa de la superfície de el líquid o de el fons de l'tub respectivament.

-La presència de bombolles disminueix la quantitat de líquid que ha d'entrar a l'reticle, interferint amb la correcta visualització i distribució de les cèl·lules. Tot això afecta significativament els resultats.

-Durant el comptatge, no aixequi la mirada d'el microscopi fins a culminar cada quadrat gran per evitar perdre.

-Un motiu d'error és inclinar la càmera després d'muntada. Per això s'ha de pujar amb cura a la platina de l'microscopi.

recomanació

Si per alguna raó vostè detecta una anormalitat en l'ompliment de la càmera, el més recomanable és que desmunti aquesta preparació, netegi la càmera i torni a muntar des de zero.

Tingueu molta cura a l'netejar la càmera per evitar el ratllat dels reticles. D'altra banda, tingui en compte que la làmina hematimètrica és delicada i fràgil. Una manipulació inadequada pot trencar-la.

Abans de començar a comptar vos que les cèl·lules hagin quedat ben distribuïdes. Una distribució desigual de les cèl·lules passa per una barreja deficient de la mostra o la dilució. Si això arribés a succeir s'ha de repetir el muntatge.

Una manera de saber si les cèl·lules estan ben distribuïdes és comparant el comptatge de cada quadrat gran, el nombre de cèl·lules comptades per cada quadrat no ha de ser exageradament diferent entre un i altre.

-Si el comptatge de glòbuls blancs dóna per sobre de 50.000 mm ³ és recomanable repetir el comptatge, fent una dilució més gran.

-Si modifica la dilució ha de tornar a calcular el factor de multiplicació, ja que això influeix en la fórmula.

referències

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Comparació de la concentració espermàtica amb la càmera de Makler i la càmera de Neubauer. Actes Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Disponible a: Scielo.
2. Cambra de Neubauer. (2018, 27 de març). Viquipèdia L'enciclopèdia lliure. Data de consulta: 04:10, 23 juny 2019 des es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Aplicació d'un mètode alternatiu de comptatge en Cambra de Neubauer per determinar la concentració de Trichomonas vaginalis. Rev. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Disponible a: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. Anàlisi de l'espermograma. Rev. Venez. Endocrinol. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Disponible a: ve.scielo
5. Guia pràctica d'hematologia de l'Escola de Bioanàlisi de la Universitat de Carabobo. Venezuela.1998