- fonament
- Característiques
- composició
- ús
- procediment
- Coloració d'estructures fúngiques de cultius
- Tinció de mostres biològiques directes
- Coloració de el tub germinatiu en la identificació de
- Fitxa de seguretat de l'Lactofenol
- salut
- inflamabilitat
- inestabilitat
- perills especials
- referències
El blau de Lactofenol o blau de cotó és un preparat amb propietats de colorant simple. És utilitzat en laboratoris clínics per pintar principalment estructures fúngiques com, hifes, tubs germinatius i espores.
Ajuda en el diagnòstic presumptiu o preliminar de certs fongs, però, sempre és aconsellable reforçar el diagnòstic amb proves més específiques, com ara proves bioquímiques o serològiques.
Representació gràfica de l'colorant blau de Lactofenol, frotis tenyit amb blau de Lactofenol, preparació muntada al microscopi. Font: public Domain Pictures.net/https://www.youtube.com/watch?v=P-kiFFZ7NvU /https://www.youtube.com/watch?v=wSZ77T5L6e8
El blau de Lactofenol es compon d'àcid làctic, blau d'anilina, glicerina, fenol i aigua desionitzada. Es pot preparar en el laboratori o pot comprar-se a punt per al seu ús. Un cop preparat ja es podrà usat, sota cap concepte ha de diluir-se, doncs aquesta acció donarà pèssims resultats.
La concentració dels seus components fan que sigui ideal per tenyir a les estructures fúngiques, pel fet que el fenol elimina la microbiota bacteriana acompanyant, mentre que l'àcid làctic genera una pel·lícula protectora al voltant de l'estructura fúngica. Finalment, el blau d'anilina té afinitat per adherir-se a les estructures de l'fong.
fonament
Amb el blau de Lactofenol es realitza una coloració simple de les estructures fúngiques d'un determinat cultiu micològic. Es diu simple perquè utilitza un sol colorant.
El blau de Lactofenol a part de tenyir, també actua com a clarificant de la mostra, gràcies a l'acció conjunta de l'àcid làctic i el fenol, a més el fenol es comporta com un mordent i alhora evita la lisi de l'microorganisme a l'inhibir els enzims hidrolítics que puguin estar presents.
Mentre que l'àcid làctic preserva la morfologia de les estructures de l'fong.
D'altra banda, el blau d'anilina té la propietat d'adherir o fixar-se a les estructures que contenen quitina. Les estructures es tenyeixen de color blau clar.
Cal destacar que la paret cel·lular dels microorganismes fúngics, especialment les floridures, contenen quitina, sent per això que aquest colorant és ideal per tenyir a aquests microorganismes.
Característiques
La solució de blau de Lactofenol és un colorant aquós, fortament àcid, d'aspecte lleugerament tèrbol, color blau clar. Es manté estable si és protegida entre 15 ° C i 25 ° C. El flascó s'ha de mantenir correctament tancat. És irritant i corrosiu per a pell i mucoses.
composició
La fórmula per preparar un litre de blau de Lactofenol és la següent:
-250 g / L d'àcid làctic
-1.0 g / L de blau d'anilina o blau de metil
-500 g / L de glicerina
-250 g / L de fenol
-250 ml d'aigua desionitzada o destil·lada.
Es dissol el fenol en l'aigua prèviament entibiada. S'addiciona l'àcid làctic i la glicerina, i es barreja molt bé. Finalment, es dissol el blau d'anilina. Es barreja novament i està llest per al seu ús.
Les porcions per preparar 80 ml de solució de blau de Lactofenol són:
-20 g cristalls de fenol
-20 ml d'àcid làctic
-40 ml de glicerina o glicerol
-20 ml aigua destil·lada.
ús
S'utilitza per tenyir estructures fúngiques i, a través de les característiques morfològiques observades a nivell microscòpic, poder realitzar un diagnòstic presumptiu de l'fong.
procediment
Coloració d'estructures fúngiques de cultius
- Es pren un cultiu pur de l'fong a el qual se li volen observar les seves estructures.
- Es treballa preferiblement en una campana de flux laminar, o sota l'encenedor, utilitzant tapaboca i guants, ja que cal complir amb normes de bioseguretat, perquè la majoria de les floridures són fàcils per disseminar-se en l'ambient i per tant representen un perill per a l'operador.
- En un portaobjeto es col·loca una gota de blau de Lactofenol.
- Es talla un quadret de cinta adhesiva de bona qualitat i amb molt de compte s'adhereix a l'extrem de la nansa de platí ja esterilitzada i freda.
- S'acosta la nansa de platí a la part més superficial de la colònia fúngica i amb molt de compte es toca el cultiu, exactament on es troba la pega de la cinta adhesiva.
- Després es porta a l'portaobjeto i es col·loca just sobre la gota de blau de Lactofenol, tenint cura que la cinta quedi perfectament estesa i lubricada amb el colorant. Amb molta delicadesa es retira la nansa de platí.
- Es posa una altra gota de blau de Lactofenol sobre la cinta i damunt un cobreobjectes. No s'ha d'exercir massa pressió per no destruir les estructures de fong, ja que aquestes són extremadament fràgils. S'ha de deixar actuar el colorant per 3 a 4 minuts aproximadament.
- Després d'aquest temps, ia la preparació està a punt per ser observada a l'microscopi en augment de 10X o 40X. Si es requereix l'observació a 100X s'ha d'utilitzar oli d'immersió.
- Les estructures de l'fong, en general, s'observen tenyides de color blau, a excepció dels fongs dematiacis que conserven la coloració cafè característica d'aquest tipus de fongs.
Tinció de mostres biològiques directes
Si es requereix estudiar una mostra biològica directa, com esputs, pus, exudats, secrecions, entre d'altres, aquestes necessiten tenir un procediment previ de descontaminació de la mostra. S'utilitza per a això solució de NaOH.
En cas de mostres de cabell aquestes es poden tenyir de forma directa.
Es prenen diversos cabells afectats (10 en total) de la / es lesions presumptives de tinya capitis (zones sense cabell) i es col·loquen sobre un portaobjectes (3 a 4 cabells per portaobjectes). A sobre es col · loca unes gotes de blau de Lactofenol i immediatament es cobreix amb un cobreobjectes.
Prengui el portaobjeto amb una pinça i calenta suaument sobre un encenedor. Per a això faci 3 a 4 passades ràpides per la flama. Observi a l'microscopi a 40X i busqui espores fora o dins de cabells (ectothrix o endothrix respectivament). Si cal col·loqui oli d'immersió i observi en 100X.
Coloració de el tub germinatiu en la identificació de
Després d'incubar el cultiu presumptiu de Candida albicans en sèrum humà durant 2 a 4 hores a 37 ° C, es pren una porció de la solució i es tenyeix amb blau de Lactofenol. La preparació s'observa a l'microscopi a 40X. El tub germinatiu si està present i les blastosporas es tenyeix de blau brillant.
Fitxa de seguretat de l'Lactofenol
L'Associació Nacional de Protecció contra el Foc (NFPA), estableix la fitxa de seguretat de les substàncies químiques pel que fa a el risc que aquesta representa segons diversos aspectes, aquests els simbolitza a través d'un rombe de colors i un nombre que va des de 0- 4.
El risc a la salut s'identifica en color blau, la inflamabilitat en color vermell, la inestabilitat o reactivitat en color groc i algun perill especial en blanc.
salut
El risc per a la salut que presenta el blau de Lactofenol segons la NFPA és de nivell 3. Això vol dir que la substància és extremadament perillosa quan és ingerit o es troba en contacte directe amb pell o mucoses.
És una substància altament corrosiva i irritant.
A l'contacte amb pell i mucoses causa cremades greus.
Si és ingerida pot causar mal de cap, confusió, letargia, inconsciència, aturada respiratòria i fins i tot la mort.
inflamabilitat
Segons la NFPA, el blau de Lactofenol es troba classificat en nivell 1 pel que fa a inflamabilitat. Això vol dir que fa combustió només si s'escalfa per sobre dels 94 ° C.
inestabilitat
Catalogat segons la NFPA en nivell 0 (zero) pel que fa a reactivitat. Això vol dir que no té risc de reactivitat, és a dir, és una substància estable químicament parlant.
perills especials
No ofereix perills especials addicionals.
referències
- Laboratori SAR. Blau de Lactofenol. 2010. Disponible a: labsar.com.
- Laboratori química clínica aplicada. Blau de Lactofenol. 2015. Disponible a: cromakit.es
- Laboratoris Merck. Microscòpia Blau de Lactofenol en solució. 2017. Disponible a: Users / Equip / Downloads
- Targeta d'Emergència. Blau de Lactofenol en solució per tinció de fongs. Universitat Pontifícia Javeriana, Bogotà Colòmbia. 2014. Disponible a: javeriana.edu.co
- González M, Diamont D, Gutiérrez B. Tècnica de tinció d'estructures fúngiques amb colorants vegetals com una alternativa no contaminant. Bioagro, 2011; 23 (1): 65-68. Disponible a: Redalyc.
- Laboratory HIMEDIA. Lactophenol Cotton Blue. 2017. Disponible from: himedialabs.com
- Wanger A, Chavez V, Huang R, Wahed A, actor J, Dasgupta A. Biochemical Tests and Staining Techniques for Microbial Identification. Sciencie Direct, 2017; 61-73. Disponible from: Elsevier