- fonament
- preparació
- Preparació casolana (no comercial)
- Preparació utilitzant medi comercial
- Preparació per a proves de fermentació
- Altres variants d'aigua peptonada
- -Aigua peptonada tamponada o bufferada
- -Aigua peptonada alcalina
- ús
- Mostres de femta
- Mostres d'aliment
- Control de qualitat
- limitacions
- referències
L' aigua peptonada és un mitjà d'enriquiment líquid, no selectiu, utilitzat principalment com a diluent de mostres d'aliments o altres materials. Aquest mitjà des del punt de vista químic és molt simple, conté peptona de carn, clorur de sodi i aigua.
Té cert valor nutritiu, permetent enriquir la mostra. Si hi ha bacteris maltractades aquest mitjà té el poder de reparar la viabilitat. És especialment útil en la recuperació de bacteris pertanyents a la família Enterobacteriaceae.
Aigua peptonada en flascons. Font: MSc. Marielsa Gil
En el cas de la recuperació de Salmonel·les es recomana l'ús de la variant d'aigua peptonada bufferada; aquesta serveix com a mitjà de pre-enriquiment de la mostra, en aquest cas conté altres elements com fosfat disòdic i fosfat dipotàssic.
Normalment l'aigua peptonada es prepara a pH neutre, però existeixen altres variants on cal que el pH sigui de 8,5 ± 0,2 (alcalí), a causa que el bacteri que es pretén aïllar és alcalófila, com ara el Vibrio cholerae.
D'altra banda, aquest mitjà pot utilitzar com a mitjà base per a proves de fermentació de carbohidrats.
fonament
Les peptones proporcionen els nutrients requerits per al desenvolupament bacterià, especialment nitrogen i aminoàcids de cadena curta, mentre que el clorur de sodi manté l'equilibri osmòtic.
A més, el mitjà permet dispersar, homogeneïtzar i reparar les cèl·lules bacterianes que han estat danyades per submissió a processos industrials.
Com diluent és ideal, substituint eficaçment a la solució fisiològica (SSF) o la solució amortidora de fosfats (PBS).
El creixement bacterià es fa evident per l'observació de la terbolesa de la mateixa.
preparació
Preparació casolana (no comercial)
Pesar 1 gr de peptona i 8,5 g de clorur de sodi, dissoldre en 1 litre d'aigua destil·lada. El pH ha de quedar ajustat a 7,0. Per a això es pot fer servir clorur de sodi 1 N.
Preparació utilitzant medi comercial
Pesar 15 g de medi deshidratat i dissoldre en un litre d'aigua destil·lada. Homogeneïtzar la barreja. Si cal es bull la barreja per 1 minut per ajudar a la dissolució total. Servir en flascons de 100 ml o en tubs de 10 ml segons sigui necessari. Autoclavar a 121 ° C per 15 minuts.
Refredar i usar o guardar en nevera. El pH final de l'mitjà és de 7,2 ± 0,2.
El color de l'mig deshidratat és beix clar i preparat és ambre clar.
Preparació per a proves de fermentació
A la preparació anterior -abans de esterilizar- se li ha d'afegir el carbohidrat a una concentració final d'1%, més l'indicador d'Andrade (fucsina àcida) o vermell de fenol (0.018 g / L). Als tubs se'ls de col·locar una campaneta de Durham per a l'observació de formació de gas.
Altres variants d'aigua peptonada
-Aigua peptonada tamponada o bufferada
Aquesta conté hidrolitzat enzimàtic de caseïna, clorur de sodi, fosfat dihidrogenado de potassi i hidrogen fosfat de sodi dodecahidrat. El pH final és de 7,0 ± 0,2.
Per a la seva preparació, tot i 20 gr de el medi deshidratat i dissoldre en 1 litre d'aigua destil·lada. Deixar en repòs per 5 minuts aproximadament. Escalfar per 1 minut fins a dissoldre completament.
Abocar sobre flascons adequats segons la necessitat. Esterilitzar utilitzant l'autoclau a 121 ° C per 15 minuts.
-Aigua peptonada alcalina
Pesar 25 g de medi deshidratat i dissoldre en 1 litre d'aigua. Procedir com s'ha descrit anteriorment. El pH oscil·la entre 8,3-8,7.
ús
El inòcul es realitza col·locant la mostra de forma directa.
Es fa servir per diluir les mostres, especialment quan se sospita que puguin haver bacteris danyades. En general les dilucions són 1:10 i 1: 100.
Es incuba per 24 hores en aerobiosi a 35-37 ° C.
Mostres de femta
Per a mostres de femta a la recerca de Salmonella es recomana l'ús d'aigua tamponada o bufferada com a mitjà de pre-enriquiment.
Per a això, procedir de la següent manera:
Si la femta estan formades prendre 1 g de mostra. Si són líquides prendre 1 ml d'excrements i suspendre en un tub amb 10 ml d'aigua peptonada bufferada. En el cas de hisopados rectals, descarregar el material contingut en l'hisop en el tub amb aigua peptonada tamponada.
En tots els casos, barrejar i homogeneïtzar molt bé la mostra.
Incubar a 37 ° C per 18 a 24 hores. Posteriorment sub-conrear en un brou d'enriquiment com brou selenito cistina o brou tetrationat a 37 ° C per 18-24 hores més. Finalment conrear en mitjans selectius per Salmonella, com ara agar SS, agar XLD, agar Hektoen, entre d'altres.
Mostres d'aliment
L'aigua peptonada s'utilitza com a mitjà d'enriquiment o com a simple diluent, però si es busquen espècies de Salmonella s'utilitza com a mitjà de pre-enriquiment, tal com ja va ser descrit.
En aliments procedeixi de la següent manera:
Per aliments sòlids malgrat 25 gr de la mostra i per a aliments líquids mesurar 25 ml d'aquest. Col · locar aquesta porció en flascons que continguin 225 ml d'aigua peptonada. Barrejar i homogeneïtzar la mostra.
Si se sospita que la càrrega microbiana és alta es poden realitzar dilucions seriades o decimals per facilitar el comptatge de les unitats formadores de colònies (UFC).
El nombre de dilucions dependrà de l'tipus de mostra i de l'experiència de l'analític.
Si per contra es sospita que la càrrega microbiana és molt baixa, no cal fer dilucions. Posteriorment, subcultivar en mitjans selectius.
En el cas d'aliments provinents de la mar, com marisc, peix, entre d'altres, a la recerca de Vibrio cholerae o altres espècies de Vibrio, s'ha d'usar aigua peptonada ajustada a pH 8,5 (aigua peptonada alcalina).
Control de qualitat
De cada lot preparat s'ha de covar un a dos tubs sense inocular per 24 hores en aerobiosi a 37 ° C. Acabat el temps no ha d'observar-terbolesa, ni canvi de color.
També es poden fer servir ceps controls conegudes per avaluar la seva efectivitat:
Per a això es poden fer servir aquestes soques bacterianes: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.
En tots els casos s'espera un desenvolupament microbià satisfactori, el qual s'observa per terbolesa de l'mig.
limitacions
-El medi deshidratat és molt higroscòpic, per la qual cosa s'ha de mantenir allunyat de la humitat.
-El mitjà no ha de ser utilitzat si s'observa algun tipus de deteriorament.
-El medi de cultiu deshidratat ha de conservar-entre 10 - 35 ° C
-El medi preparat s'ha de mantenir refrigerat (2-8 ° C).
referències
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B i Velázquez O. Tècniques per a l'Anàlisi Microbiològic d'Aliments. 2009, 2a ed. Facultat de Química, UNAM. Mèxic. Versió per Administrador d'Manuals i Documents (AMyD) de la Facultat de Química, UNAM 1. Disponible a:
- Laboratoris Britània. Aigua peptonada bufferada. 2015. Disponible a: britanialab.com
- Laboratoris Neogen. Aigua peptonada. Disponible a: foodsafety.neogen.com
- Laboratoris Britània. Aigua peptonada. 2015. Disponible a: britanialab.com
- Laboratoris Merck. Aigua peptonada tamponada. Disponible a: merckmillipore.com
- Laboratoris Conda Pronadisa. Aigua peptonada alcalina. Disponible a: condalab.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnòstic Microbiològic de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.