- fonament
- Aportació de nutrients
- poder selectiu
- poder diferencial
- Balanç osmòtic i agent solidificant
- preparació
- Solució de telurito de potassi a l'1% p / v
- Medi base d'agar Vogel-Johnson
- ús
- Control de qualitat
- referències
L' agar Vogel-Johnson és un mitjà de cultiu sòlid, selectiu i diferencial, especialment formulat per a l'aïllament de Staphylococcus aureus. Aquest mitjà va ser creat per Vogel i Johnson el 1960 a partir de la modificació de l'agar telurito glicina formulat en 1955 per Zebovitz, Evans i Niven.
La modificació va consistir en augmentar la concentració de manitol present en el medi i en la incorporació d'un indicador de pH. La fórmula actual està composta per tripteína, extracte de llevat, manitol, fosfat dipotàssic, clorur de liti, glicina, vermell de fenol, agar, solució de telurito de potassi a l'1% i aigua.
Font: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica Procreatec. Flickr.
Cal destacar que hi ha altres mitjans que a l'igual que l'agar Vogel-Johnson són selectius per a l'aïllament de S. aureus, com ara l'agar manitol salat i l'agar Baird Parker. En aquest sentit, es podria dir que el fonament de l'agar Vogel - Johnson és una barreja entre l'agar manitol salat i l'agar Baird Parker.
En el primer les colònies de S. aureus es distingeixen per fermentar el manitol i fer virar l'indicador de pH a groc. D'altra banda, en el segon el S. aureus es caracteritza per reduir el telurito a tel·lur i formar colònies grises a negres. Les dues propietats són observades en l'agar Vogel-Johnson.
Aquest mitjà, a l'igual que els seus homòlegs, és útil per a la detecció de Staphylococcus aureus en mostres d'aliment, controls sanitaris de productes industrials i en mostres clíniques.
fonament
Aportació de nutrients
El medi Vogel - Johnson conté tripteína i extracte de llevat; ambdues substàncies proporcionen aminoàcids de cadena llarga que serveixen com a fonts de carboni i de nitrogen necessaris per al creixement bacterià. Els bacteris capaços de créixer en aquest mitjà prenguessin els nutrients d'aquestes substàncies.
poder selectiu
El agar Vogel - Johnson és capaç d'inhibir el creixement de bacteris Gram negatives i fins i tot algunes Gram positives, afavorint el desenvolupament dels estafilococs coagulasa positius. Les substàncies inhibidores són el telurito de potassi, el clorur de liti i la glicina.
poder diferencial
Les substàncies que fan a aquest mitjà diferencial són el manitol i el telurito de potassi. El manitol és un carbohidrat, i quan és fermentat es produeixen àcids que fan virar el mitjà de vermell a groc, la qual cosa succeeix gràcies a la presència de l'indicador de pH vermell de fenol.
Com a, el telurito incolor quan és reduït a tel·luri lliure metàl·lic, pren un color gris fosc a negre.
El Staphylococcus aureus fermenta el manitol i redueix el telurito a tel·luri. Per això les colònies típiques de S. aureus en aquest mitjà són grises o negres envoltades d'un mitjà color groc.
Els bacteris que creixen en aquest mitjà i no redueixen el telurito ni fermenten el manitol, formaran colònies transparents envoltades d'un mitjà color vermell, fins i tot més intens que el color original, a causa de la alcalinització de l'mig per la utilització de les peptones.
D'altra banda, els bacteris que redueixin el telurito però no fermentin el manitol creixeran com colònies grises o negres envoltades d'un mitjà color vermell intens.
Si el mitjà es preparés sense l'addició de l'telurito de potassi, les colònies de S. aureus es desenvoluparien com colònies grogues, envoltades d'un mitjà groc, tal com succeeix en l'agar manitol salat.
Balanç osmòtic i agent solidificant
El fosfat dipotàssic manté el balanç osmòtic de l'mig i ajusta el pH a la neutralitat 7,2. Mentre que l'agar li brinda la consistència sòlida a el mitjà de cultiu.
preparació
Solució de telurito de potassi a l'1% p / v
Aquesta solució no ve inclosa en el medi deshidratat, pel fet que no pot ser esterilitzada en autoclau. Per aquesta raó es prepara a part i s'afegeix a l'mig ja esterilitzat.
Algunes cases comercials venen la solució de telurito de potassi a l'1% llista per utilitzar. Si es desitja preparar al laboratori es procedeix de la següent manera:
Pesar 1.0 g de telurito de potassi i mesurar 100 ml d'aigua destil·lada. Disuelver el telurito de potassi en una part d'aigua i posteriorment completar la quantitat d'aigua fins arribar a 100 ml. Esterilitzar la solució pel mètode de filtració.
Medi base d'agar Vogel-Johnson
Pesar 60 g de medi deshidratat, i dissoldre en 1 litre d'aigua destil·lada. S'escalfa la mescla fins ebullició per ajudar a la dissolució completa. Durant el procés de dissolució s'agita el medi freqüentment.
Esterilitzar en autoclau a 15 lliures de pressió i 121 ° C per 15 minuts. Eliminar de l'autoclau i deixar reposar fins que el medi arribi a una temperatura aproximada de 45 a 50 ° C. Addicionar 20 ml de la solució de telurito de potassi prèviament preparada a l'1%.
Barregi i aboqui en plaques de Petri estèrils. Deixi solidificar i ordeni de forma invertida en plaqueros per guardar posteriorment a la nevera fins al seu ús.
El pH final de l'mig preparat ha de quedar en 7,2 ± 0,2.
Abans de sembrar una mostra s'ha d'esperar que la placa prengui la temperatura de l'ambient.
El color de l'medi preparat és vermell.
ús
Tot i que pot ser utilitzat per a l'aïllament de S. aureus en qualsevol tipus de mostres, és majorment usat per a l'anàlisi microbiològica de productes farmacèutics, cosmètics i aliments.
Es recomana que l'inòcul sigui dens. El sembrat pot realitzar-se per estriació amb nansa de platí o per superfície amb espàtula de Drigalski.
Les plaques s'incuben a 35-37 ° C durant 24 a 48 hores en aerobiosi.
Control de qualitat
Per realitzar el control de qualitat a l'mig Vogel- Johnson es poden fer servir aquestes soques controls:
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 o Proteus mirabilis ATCC 43071.
El resultat esperat és el següent: per a les soques de S. aureus creixement satisfactori amb colònies negres envoltades de mig groc. Per S. epidermidis creixement regular amb colònies translúcides o negres envoltades de mig color vermell.
Així mateix, per a E. coli s'espera que hi hagi inhibició total, i per Proteus mirabilis inhibició parcial o total; si creix ho farà escassament i les colònies seran negres envoltades de mig color vermell.
referències
- BD Laboratoris. VJ (Vogel and Johnson Agar). 2006. Disponible a: bd.com
- Laboratoris Britània. Vogel- Johnson Agar. 2015. Disponible a: britanialab.com
- Laboratoris Britània. Telurito de potassi. 2015. Disponible a: britania.com
- Laboratori HIMEDIA. Vogel- Johnson Agar Medium. 2018. Disponible a: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
- Vogel- Johnson Agar Base. Merck Microbiology Manual. 12th Edition, pp 502-503. Disponible a: Users / Equip / Downloads
- Contribuïdors dóna Wikipédia, «agar Vogel Jonhson», Wikipédia a enciclopèdia livre, disponível em: wikipedia.org.
- Norma Veneçolana Covenin 1292-1289. (1989). Aliments. Aïllament i recompte de Staphylococcus aureus. Disponible a: sencamer.gob.ve