AGAR THAYER MARTIN: FONAMENT, PREPARACIÓ I USOS - BIOLOGIA - 2025

El agar Thayer Martin és un mitjà sòlid altament nutritiu i selectiu per a l'aïllament de Neisseria meningitidis i Neisseria gonorrhoeae; ambdues conegudes com neissèria patògens o d'importància clínica.

Una de les característiques especials més importants que presenta l'agar Thayer Martin és el seu alt contingut en suplements nutritius. Aquesta propietat és indispensable, pel fet que les neissèria són microorganismes molt exigents des del punt de vista nutricional i per tant no creixen en mitjans comuns.

Medi comercial Thayer Martin / Agar Thayer Martin. Font Imatge 1: Presa per l'autora MSc. Marielsa Gil, imatge 2. Pixinio.com bacteriacolonized, modificat, Thayer, Martin, agar.

D'altra banda, pel fet que aquests microorganismes normalment es troben en àrees no estèrils és necessària l'addició d'inhibidors que impedeixin el creixement de la flora acompanyant, sense que això afecti el desenvolupament de l'gènere Neisseria.

Aquest agar està compost per agar base GC, hemoglobina, suplements nutricionals addicionals i un complex de substàncies inhibidores (antibiòtics i antifúngics). Les cases comercials expenen cadascun dels suplements per separat.

La mostra a sembrar en aquest mitjà dependrà de l'microorganisme que s'estigui buscant. Per Neisseria gonorrhoeae les mostres ideals són secrecions vaginals i uretrals. Mentre que per Neisseria meningitidis les mostres més usades són LCR, exsudats faringi i nasofaringis.

fonament

Les neissèria són microorganismes catalogats com enutjosos i per tant el seu aïllament és difícil. Per això, el Thayer Martín és un mitjà complex i cadascun dels seus components compleix una funció que a continuació s'expliquen:

Agar base GC

L'agar GC conté proteosa peptona, midó de blat de moro, clorur de sodi, fosfat dipotàssic, fosfat monopotàssic i agar-agar. Els seus components aporten els nutrients bàsics per al desenvolupament microbià, neutralitzen els àcids grassos tòxics, contribueixen a mantenir el balanç osmòtic, defineixen el pH i brinden la consistència sòlida a l'mig.

hemoglobina

L'hemoglobina brinda els factors V i X (nicotinamida adenina dinucleòtid NAD i hemina respectivament). Per això en aquest mitjà també creixen espècies d'Haemophilus. L'hemoglobina pot ser obtinguda comercialment de forma deshidratada o pot addicionar sang bovina fresca desfibrinada a el medi.

Suplement d'enriquiment

D'altra banda, a l'mig Thayer-Martin també se li ha de afegir un suplement d'enriquiment, ja que els nutrients que conté l'agar base no són suficients per als requeriments de l'gènere Neisseria.

El suplement d'enriquiment més comunament utilitzat es diu isovitalex. Aquest conté glutamina, adenina, NAD, cocarboxilasa, guanina, nitrat fèrric, àcid p-amino benzoic, vitamina B12, tiamina i glucosa. Tots aquests compostos són necessaris per al bon desenvolupament de les neissèria patògenes.

inhibidors

Per ser un mitjà altament nutritiu s'han d'utilitzar inhibidors que impedeixin el creixement de microorganismes de la flora habitual de l'àrea i així afavorir l'aïllament de l'gènere Neisseria.

El complex d'inhibidors està compost per vancomicina, colistina i nistatina. La vancomicina inhibeix el creixement de bacteris Gram positives, la colistina impedeix el desenvolupament de bacteris Gram negatives com Pseudomonas i algunes neissèria sapròfits, i la nistatina actua sobre els llevats com Candida albicans.

No obstant això, després es va modificar l'agar Thayer Martin; els canvis van consistir en l'addició de trimetoprim, l'augment en la quantitat d'agar i l'agregat de glucosa extra. Aquests canvis van millorar significativament la recuperació de les espècies de Neisseria gonorrhoeae.

Cal destacar que el trimetoprim inhibeix el creixement de l'gènere Proteus i la seva conseqüent formació de swarming. En aquest sentit, els antibiòtics són els que proveeixen el caràcter selectiu a l'mig Thayer Martin.

preparació

Agar Thayer Martin original

-Agar GC

Pesar 8,2 g de medi GC deshidratat i suspendre en 100 ml. Barrejar i bullir per 1 minut amb agitació freqüent per dissoldre íntegrament. Esterilitzar la barreja en autoclau a 121 ° C per 15 minuts.

-Hemoglobina a el 2%

Suspendre 2 g d'hemoglobina deshidratat en 2 o 3 ml d'aigua destil·lada calenta fins a formar una barreja uniforme. Addicionar a poc a poc més aigua fins a completar un volum de 100 ml. La suspensió ha de quedar homogènia abans d'esterilitzar.

Esterilitzar en autoclau per 15 minuts.

-Suplement d'enriquiment

Reconstituir el vial comercial amb el diluente proporcionat per la mateixa casa comercial. Barrejar bé. La quantitat de diluente a fer servir serà especificada en el instructiu de el kit.

-Suplement d'inhibició VCN (vancomicina, colistin, nistatina)

Reconstituir el vial amb el diluente proveït per la casa comercial. Barrejar bé. La quantitat de diluente a fer servir serà especificada en el instructiu de el kit.

-preparat

Per cada 100 ml d'agar GC procedir de la següent manera:

A l'sortir de l'autoclau l'agar GC, deixar refredar fins a una temperatura aproximada de 50 ° C i afegir 2 ml de la solució d'hemoglobina preparada, 2 ml d'el suplement d'enriquiment (isobitalex o britalex), i 2 ml d'el suplement d'inhibició. Barrejar i servir en plaques de Petri estèrils.

Deixar solidificar i guardar a la nevera fins al seu ús.

El color de l'medi preparat és vermell cirera. El pH final de l'mitjà és de 7,2 ± 0,2

Agar Thayer Martin modificat

Pesar 8,2 g de medi GC deshidratat i suspendre en 100 ml. Afegir 1 gr d'agar-agar i afegir 0,3 g de glucosa. Barrejar i bullir per 1 minut amb agitació freqüent per dissoldre íntegrament. Esterilitzar la barreja en autoclau a 121 ° C per 15 minuts.

Preparar l'hemoglobina i el suplement d'enriquiment com va ser descrit anteriorment.

El suplement d'inhibició utilitzat és VCNT (vancomicina, colistin, nistatina, trimetoprim).

-preparat

Procedir de la forma descrita per l'agar Thayer Martin original.

ús

L'agar Thayer Martin s'ha de deixar temperar abans de sembrar les mostres. Les mostres comunament utilitzades són exsudats faringis, exsudats nasals, secreció vaginal, uretral i / o rectal i LCR.

Utilitzar mostres recentment preses i fer inòculs fortes sobre l'agar. Les mostres es sembren directament per descàrrega de material i després s'estria per esgotament sobre la superfície.

Les plaques s'incuben a 35-37 ° C per 24 a 48 hores en gerra de microaerofilia (5% CO ₂). Acabat el temps d'incubació s'examinen les plaques a la recerca de colònies petites, color gris i algunes vegades d'aspecte mucoide.

Realitzar Gram i les proves bioquímiques confirmatòries a les colònies sospitoses.

Control de qualitat

Per realitzar el control de qualitat a l'agar Thayer Martin es poden fer servir aquestes soques microbianes.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49.226 i Neisseria meningitidis ATCC 13090; en ambdues soques s'espera un desenvolupament satisfactori.

També s'han d'incloure les següents soques: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 i Candida albicans ATCC 10231. En totes elles s'espera una inhibició total o parcial en aquest mitjà.

limitacions

-Cal tenir present que en el medi poden créixer bacteris que siguin resistents als inhibidors utilitzats.

-Hi soques de Neisseria gonorrhoeae que poden ser sensibles a la concentració de vancomicina utilitzada. Per aquest motiu es recomana utilitzar paral·lelament agar xocolata suplementat amb isovitalex, però sense inhibidors.

-Hi soques de llevats resistents a nistatina que poden créixer en aquest mitjà i interferir en l'aïllament de les neissèria patògens, especialment els gonococos.

referències

1. Laboratoris Valtek diagnòstic. Agar Thayer-Martin.2016. Disponible a: com
2. Laboratoris Britània. Thayer Martin Medi Modificat. 2010. Disponible a: britanialab.com
3. Wikipedia contributors. Thayer-Martin agar. Viquipèdia The Free Encyclopedia. October 26, 2017, 16:33 UTC. Disponible a: wikipedia.org4. Accessed February 28, 2019.
4. Laboratoris Britània. Agar GC. 2010. Disponible a: britanialab.com.
5. Laboratories BBL ™ Medium Enrichment for Fastidious Microorganisms. 1999. Disponible in: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnòstic Microbiològic de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.