- fonament
- preparació
- Plaques d'agar soja tripticaseína
- Plaques d'agar soja tripticaseína suplementat amb sang
- Plaques d'agar soja tripticaseína suplementada amb sang escalfada
- Falques d'agar soja tripticaseína
- usos
- sembrat
- Control de qualitat
- Control d'esterilitat
- Control de creixement
- Control de creixement i patró d'hemòlisi de l'agar soja tripticaseína suplementat amb sang
- referències
El agar soja tripticaseína o agar soja tripticasa és un mitjà de cultiu sòlid, no selectiu i nutritiu. Es designa amb les lletres TSA per les sigles en anglès Trypticase Sóc Agar. Està compost per tripteína, peptona de soja, clorur de sodi i agar-agar.
Pel seu alt poder nutritiu és ideal per al cultiu de microorganismes moderadament exigents i no exigents. El mitjà sense suplements addicionals no és recomanable per a cultius primaris, però és molt útil per subcultivar ceps pures i mantenir-les viables, entre altres usos.
Falques d'agar soja tripticaseína en tubs amb tapa de baquelita. Font: Fotografia presa per l'autora MSc. Marielsa Gil.
També, aquest agar serveix com a base per a la preparació de mitjans enriquits com l'agar sang, especialment quan es requereix observar els patrons d'hemòlisi i per muntar els taxos de optoquina i bacitracina, requerits en el diagnòstic de Streptococcus pneumoniae i Streptococcus pyogenes respectivament.
D'altra banda, quan es combina amb antibiòtics és útil per aïllar microorganismes anaerobis facultatius i estrictes d'importància clínica provinents de mostres amb flora mixta.
Finalment, la composició de l'agar soja tripticaseína i el seu rendiment compleix amb les exigències establertes per les diferents farmacopees (europea, japonesa i nord-americana).
fonament
Per al bon desenvolupament dels bacteris cal la presència d'aportacions energètics, com ara aminoàcids, vitamines, bases púriques i pirimídicas.
En aquest sentit, la tripteína i la peptona de soja brinden aquests nutrients als microorganismes, permetent així el seu desenvolupament ple. No obstant això, per als bacteris exigents cal suplementar aquest agar amb sang desfibrinada o sang escalfada per augmentar la seva enriquiment.
D'altra banda, si a l'mig se li afegeixen antibiòtics, el mateix esdevé un medi selectiu. També se li pot addicionar 0.6% d'extracte de llevat per afavorir l'aïllament d'espècies de l'gènere Listeria, mentre que l'agregat de cistina telurito i sang de xai és ideal per Corynebacterium diphteriae.
Finalment, el clorur de sodi li brinda el balanç osmòtic a el medi i l'agar li proporciona la consistència sòlida.
preparació
Plaques d'agar soja tripticaseína
Per preparar l'agar soja tripticaseína s'han de pesar 40 g de medi comercial deshidratat en una balança digital. Es dissol en un litre d'aigua destil·lada continguda en una fiola.
La barreja es deixa en repòs per 5 minuts i posteriorment es porta a una font de calor per ajudar a la dissolució de l'mig. S'ha de agitar freqüentment i deixar bullir per 1 o 2 minuts. Posteriorment, s'esterilitza el medi en autoclau a 121 ° C per 15 minuts.
Deixar refredar fins a 50 ° C i distribuir en plaques de Petri estèrils. Deixar solidificar, invertir, ordenar en plaqueros i guardar en nevera.
El pH final de l'mig ha de quedar en 7,3 ± 0,2.
S'ha de tenir en compte que el color de el mitjà de cultiu deshidratat és beix clar i s'ha d'emmagatzemar entre 10 a 35 ° C, en lloc sec.
Per la seva banda, l'agar preparat és de color ambre clar. Les plaques preparades s'han de guardar en nevera (2 a 8 ° C) fins al seu ús.
Les plaques han d'assolir la temperatura ambient abans de ser utilitzades.
Plaques d'agar soja tripticaseína suplementat amb sang
L'agar sang es prepara addicionant 5% de sang desfibrinada a l'hora de refredar l'agar soja tripticaseína a 50 ° C. La barreja s'homogeiniza rotant amb moviments suaus.
Servir en les plaques de Petri estèrils. El color de l'mig ha de quedar vermell cirera.
Plaques d'agar soja tripticaseína suplementada amb sang escalfada
Per preparar l'agar sang amb base de TSA es procedeix igual als procediments ja descrits, però a l'sortir de l'autoclau es deixa reposar fins que la temperatura de l'mig estigui aproximadament entre 56 a 70ºC. En aquest moment es col·loca la sang i es barreja fins que el medi es torni color marró.
Servir en plaques de Petri estèrils. El color de l'mitjà és marró xocolata.
Falques d'agar soja tripticaseína
El procediment de preparació de l'agar és igual a l'descrit per plaques, amb la diferència que en comptes de servir el mitjà sobre plaques de Petri, es distribueix entre 10 a 12 ml en tubs amb tapa de baquelita abans d'esterilitzar.
Posteriorment, es autoclavan els tubs a 121 ° C per 15 minuts. A l'sortir s'inclinen amb ajuda d'un suport i es deixen solidificar.
Les falques preparades es sembren per superfície i serveixen per mantenir certs microorganismes no exigents viables, per un temps determinat.
usos
L'agar soja tripticaseína s'usa en els següents casos:
-Com base per preparar l'agar sang clàssic que es fa servir de rutina en la majoria dels laboratoris.
-El aïllament de bacteris exigents.
-Observació de el patró d'hemòlisi.
-Execució de proves diagnòstiques.
-Com base per preparar agar sang especial per Corynebacterium diphteriae, amb cistina telurito i sang de be.
-Com base per preparar agar sang de be, més kanamicina-vancomicina per al creixement de anaerobis, especialment Bacteroides sp.
- Per manteniment de soques no exigents (Bacterioteca).
- Recompte microbià aerobi en l'estudi de límit microbià de mostres d'aigua, ambient, aliments i cosmètics.
sembrat
Les mostres es poden sembrar de manera directa sobre la superfície de l'agar soja tripticaseína suplementat amb sang o altres additius. Es sembra per esgotament.
Com a, les plaques d'agar soja tripticaseína sense additius es fan servir per subcultivar soques microbianes (bacteris o llevats).
Control de qualitat
Control d'esterilitat
Per comprovar l'esterilitat dels diferents mitjans preparats amb l'agar base soja tripticaseína es recomana fer el següent: de cada lot preparat s'ha de covar 1 o 2 plaques o tubs sense inocular a 37 ° C per 24 hores per demostrar la seva esterilitat. En tots els casos ha de ser no creixement.
Si es comprova contaminació, el lot complet ha de ser descartat.
Control de creixement
Per estudiar el bon funcionament de l'agar soja tripticaseína es poden fer servir aquestes soques bacterianes: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 i Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Se sembren els ceps i s'incuben en aerobiosi a 37 ° C per 24 hores.
En tots els casos el creixement ha de ser satisfactori.
També es poden usar fongs com el Complex Candida albicans ATCC 10231 i Aspergillus niger ATCC 16404. S'espera un bon creixement per a les dues soques.
Control de creixement i patró d'hemòlisi de l'agar soja tripticaseína suplementat amb sang
Per verificar el bon funcionament de l'agar sang preparat amb aquesta base es poden fer servir aquestes soques: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 i Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.
Se sembren i s'incuba a 37 ° C a microaerofilia per 24 hores.
En tots els casos el creixement ha de ser satisfactori, tenint en compte que en S. pyogenes ha d'observar-beta-hemòlisi (halo clar al voltant de la colònia) i en les dues soques de S. pneumoniae s'ha d'observar hemòlisi alfa (halo verdós al voltant de les colònies).
referències
- Wikipedia contributors. Trypticase sóc agar. Viquipèdia The Free Encyclopedia. December 17, 2018, 15:47 UTC. Disponible a:
- Laboratoris Britània. Tripteína soja agar. 2015. Disponible a: britanialab.com
- Laboratoris Neogen. Agar de soja tríptic. Disponible a: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnòstic Microbiològic de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
- Laboratoris BD. Trypticase Sóc Agar. 2014. Disponible a:.bd.com