- fonament
- poder nutritiu
- consistència
- selectiu
- diferencial
- preparació
- ús
- limitacions
- Control de qualitat
- referències
L' agar Salmonella-Shigella també conegut com agar SS, és un mitjà moderadament selectiu i diferencial, especialment dissenyat per a l'aïllament de bacteris enteropatògenes dels gèneres Salmonella i Shigella, tant de mostres ambientals com clíniques.
L'agar SS té una composició complexa; està constituït per extracte de carn, peptona, lactosa, sals biliars, citrat de sodi, tiosulfat de sodi, citrat fèrric, agar, vermell neutre, verd brillant i aigua destil·lada. Donada la seva gran selectivitat es poden sembrar mostres amb abundant flora mixta.
Agar SS amb colònies de Salmonella sp. Font: Manurx27, from Wikimedia Commons
En els laboratoris de microbiologia el medi Salmonella-Shigella és molt utilitzat per investigar la presència de Salmonella i Shigella en mostres de femta diarreiques, aigües residuals, aigua potable i aliments.
De vegades és necessari utilitzar brous de pre-enriquiment (brou lactosat) i enriquiment (brou selenito cistina) per recuperar soques de Salmonella.
Aquests passos són requerits quan es sospita l'existència de Salmonella en molt baixa quantitat, o on el cep pugui estar maltractada per processos propis de la producció industrial, principalment d'aliments processats. També és aconsellable enriquir mostres de femta provinents de pacients que han estat tractats amb antibiòtics.
Posteriorment, el brou enriquit es pot sembrar en agar Salmonella-Shigella i en altres mitjans similars, com l'agar xilosa, lisina desoxicolato (XLD) i agar Hektoen entèric (HE).
fonament
Cada component de l'medi de cultiu Salmonella-Shigella posseeix una funció específica, i el conjunt de la barreja li brinda les propietats que el caracteritzen.
poder nutritiu
L'extracte de carn i la peptona (digerit de caseïna i de teixit animal) proporcionen els nutrients requerits (nitrogen, carboni i vitamines) per al desenvolupament dels microorganismes capaços de tolerar la resta dels components.
consistència
L'agar-agar és l'encarregat de brindar la consistència sòlida a l'mig.
selectiu
Aquest mitjà és altament selectiu pel fet que conté sals biliars, citrat de sodi i verd brillant. Per això, inhibeix el creixement de tots els bacteris Gram positives i de la majoria dels bacils Gram negatius, incloent alguns coliformes.
Mentre que els bacteris de l'gènere Salmonella i algunes soques de Shigella si suporten aquests compostos.
Principalment, el gènere Salmonella és molt resistent a les sals biliars, tant que són capaços de viure a la vesícula biliar d'alguns pacients portadors que expulsen el bacteri constantment per la femta.
diferencial
La lactosa és el carbohidrat fermentable que ajuda a diferenciar les soques fermentadoras de lactosa de les no fermentadoras. Aquesta propietat és evidenciada per la presència de l'indicador de pH, que en aquest medi és el vermell de fenol.
Els ceps fermentadors de lactosa donen colònies vermelles, mentre que les no fermentadoras són incolores. Aquesta característica és important, ja que Salmonella i Shigella no fermenten la lactosa.
D'altra banda, aquest mitjà conté tiosulfat sòdic com a font de sulfur i citrat fèrric com a font de ferro. Tots dos compostos aconsegueixen diferenciar als bacteris capaços de produir sulfur d'hidrogen. Aquestes reaccionen per formar un precipitat negre de sulfur fèrric insoluble i visible.
Aquesta propietat la tenen alguns ceps de l'gènere Salmonella. Normalment les seves colònies són planes incolores amb un punt negre al centre de la mateixa. La resta de les Salmonel·les no produeixen H 2 S i es desenvolupen com colònies incolores.
D'altra banda, les colònies de l'gènere Shigella són planes incolores sense ennegriment.
preparació
Aquest mitjà és molt senzill de preparar.
Pesar 63 g de el medi comercial deshidratat i dissoldre en un litre d'aigua destil·lada. Escalfar la dissolució i agitar. La barreja pot arribar fins l'ebullició fins durant minuts.
Aquest mitjà no ha de autoclavarse. Després de la seva dissolució es serveix directament sobre plaques estèrils senzilles o dobles.
A l'solidificar s'ordenen de forma invertida en plaqueros i es guarden a la nevera (2-8 ° C) fins al seu ús.
El mig després de preparat ha de quedar a pH 7,2 ± 0.2 i amb color vermell taronja.
És important deixar temperar les plaques abans de sembrar les mostres. Es pot sembrar directament la mostra original, descarregant material en una part de l'agar i després a partir d'allí estriar per esgotament.
En cas d'usar brous enriquits, passar una porció de l'brou selenita i sembrar amb espàtula de drigalski.
Es incuba a 37 ° C durant 24 hores en aerobiosi.
Cal tenir en compte que la quantitat de grams tot i el pH final de l'medi poden variar d'una casa comercial a una altra. El envàs de medi sempre porta les indicacions per a la seva preparació.
ús
S'usa freqüentment en l'anàlisi de coprocultius i en l'estudi microbiològic de mostres d'aigua residuals, aigües de consum i aliments.
Freqüentment es preparen plaques dobles, en un costat es col·loca agar Salmonella-Shigella i en l'altre agar XLD.
limitacions
-Algunes soques de Shigella no creixen en aquest mitjà. Per tant, no es recomana per a aïllament primari d'aquest gènere.
-No tota colònia transparent amb centre negre és indicatiu de Salmonella; s'han de fer proves bioquímiques per fer una correcta identificació, ja que les colònies d'algunes soques de Proteus són indistingibles de les d'Salmonella.
-El medi deshidratat ha de cuidar-se de l'exposició a l'ambient, ja que és molt higroscòpic. Per tant, s'ha de mantenir en ambient sec i ben tancat. Obrir per períodes molt curts.
-Amb el temps les sals biliars de l'mig poden precipitar, formant una imatge similar a un embullat dins de l'agar, però això no afecta els resultats.
-Algunes soques de Shigella poden fermentar de forma lenta la lactosa.
Control de qualitat
Per provar que el medi està funcionant correctament, és recomanable sembrar ceps controls conegudes o certificades i observar si el creixement compleix amb les característiques esperades.
Per a això es poden utilitzar soques d'E coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis.
Els resultats esperats són:
Enterobacter i Klebsiella ------ colònies grans i mucoides vermelles o rosades.
Shigella flexneri ---------- colònies planes transparents o incolores.
Salmonella typhimurium ------ colònies incolores amb centre negre.
Enterococcus faecalis -------- inhibició total.
referències
- Laboratoris Difco Francisco Soria Melguizo. Salmonella-Shigella agar. 2009. Disponible a: f-soria.es
- Laboratori BD. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Disponible a: bd.com
- Laboratoris Britània. Salmonella-Shigella Agar. 2015. Disponible a: britanialab.com
- Valtek diagnostics. Agar Salmonella-Shigella (Agar SS) 2010. Disponible a: andinamedica.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnòstic Microbiològic de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Köneman I, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnòstic Microbiològic. 5ta ed. Editorial Panamericana SA Argentina.