El agar sal i manitol o manitol salat és un mitjà de cultiu sòlid, selectiu i diferencial. Va ser creat per Chapman per a l'aïllament de cocos Gram positius patògens, especialment Staphylococcus aureus.
No obstant això, també és útil per aïllar Staphylococus epidermidis, que en ocasions pot estar present com a patogen oportunista, i Staphylococcus saprophyticus, reconegut patogen urinari, entre altres espècies.
A. Fiola amb mig agar manitol salat preparat. B. Plaques d'agar manitol salat sembrats amb soques bacterianes fermentadoras i no fermentadors de manitol. Font: A i B: Fotos preses per l'autora MSc. Marielsa Gil.
Alguns Enterococcus són capaços de créixer en aquest medi, així com també certs bacils Gram positius formadors d'espores.
Aquest mitjà és de gran utilitat en l'anàlisi de mostres clíniques, però també s'usa en l'estudi microbiològic d'aliments i en el control de qualitat de productes industrials, com cosmètics, medicines, entre d'altres.
L'agar manitol salat està compost per extractes i peptones de carn bovina, tripteína, manitol, clorur de sodi, vermell de fenol i agar.
fonament
L'agar manitol és selectiu gràcies a l'alta concentració de sal que posseeix. La salinitat actua com a substància inhibitòria i evita el creixement de bacteris Gram negatives.
També és diferencial a causa de la presència de l'carbohidrat manitol i a l'indicador de pH vermell de fenol. A partir d'aquest, els bacteris capaços de fermentar el manitol produeixen àcids, acidificant el medi, tornant-se les colònies i el mitjà de color groc.
D'altra banda, les colònies que no fermenten el manitol creixen en el medi prenent els nutrients que els proporciona els extractes i peptones de carn i la tripteína. D'allí els bacteris extreuen el carboni, el nitrogen, les vitamines i els minerals necessaris per al seu creixement.
Les colònies en aquest cas poden ser rosades feble o forts, i el medi es queda de el mateix color o canvia a fúcsia.
L'agar és la substància que proporciona la consistència a l'mig.
preparació
Per preparar un litre d'agar manitol salat es pesen 111 g de medi deshidratat de la casa comercial de preferència i es dissolen en 1000 ml d'aigua destil·lada, utilitzant una fiola.
S'aplica calor removent freqüentment el mitjà per millorar el procés de dissolució. Es deixa bullir durant un minut.
Es col·loca la fiola en l'autoclau a 121 ° C per 15 minuts.
Acabat el temps, es treu la fiola de l'autoclau, es deixa reposar i es serveix entre 15 a 20 ml sobre plaques de Petri estèrils quan la temperatura sigui aproximadament de 50 a 55 ° C.
Es deixa solidificar, ordenant de forma invertida en plaqueros i guardant en nevera fins al seu ús. Abans de sembrar una mostra, s'ha d'esperar al fet que la placa prengui la temperatura de l'ambient.
Se sembren les plaques per estriació o per sembrat en superfície amb espàtula de drigalski. El pH final de l'mig preparat ha de quedar en 7,4 ± 0,2
El color de l'mig deshidratat és beix clar i el color de l'medi preparat és vermell taronja.
usos
Per la seva alta selectivitat, aquest mitjà és ideal per sembrar mostres amb flora mixta en què es vol buscar la presència de Staphylococus aureus, com a principal patogen d'aquest gènere.
En aquest sentit, un dels seus usos més freqüents és en l'anàlisi microbiològic de mostres de exsudats faringis i secreció nasal, especialment per detectar portadors asimptomàtics de S. aureus.
Alguns països han implementat aquesta anàlisi com a requisit obligatori per a persones que desitgen treballar com expenedors d'aliments.
Aquest control prevé que es contractin persones portadores de S. aureus, evitant-se així que hi hagi intoxicacions alimentàries massives, a causa de el consum d'aliments contaminats amb l'enterotoxina estafilocòccica.
També es pot incloure en la sembra d'infeccions de ferides, hemocultius, LCR, rentat bronco alveolar, entre d'altres.
L'agar manitol salat és útil per reaislar colònies d'urocultius provinents d'agar CLED o agar sang el Gram hagi revelat cocos Gram positius en raïms.
També és vàlid en l'anàlisi microbiològic d'aliments, aigua potable, terres, entre altres aplicacions.
Control de qualitat
Un cop preparat un lot de plaques amb agar manitol salat és aconsellable realitzar un control de qualitat. Se sembren ceps controls per evidenciar si hi ha o no creixement dels mateixos.
Com a control positiu es poden usar soques conegudes de Staphylococcus aureus. El mateix ha de créixer satisfactòriament desenvolupant colònies grogues, i el medi també es torna de el mateix color.
Així mateix, és convenient incloure un cep coneguda de Staphylococcus epidermidis. Ha de créixer satisfactòriament desenvolupant colònies de color rosades, i el medi es queda de el mateix color o s'enfosqueix en un rosat més fort.
Com a control negatiu, s'utilitzen ceps que no haurien de créixer en aquest mitjà. Per exemple, es pot sembrar un cep coneguda d'Escherichia coli o Klebsiella pneumoniae. El resultat esperat és inhibició completa, és a dir, no creixement.
A més a s'ha de covar una placa sense inocular. En el mateix no ha d'haver creixement, ni canvi de color.
És important que no es faci servir la placa si es tenen indicis de deteriorament, com contaminació, deshidratació, decoloració, entre d'altres.
consideracions finals
A l'usar el medi agar manitol salat cal tenir en consideració alguns aspectes importants:
-Obtenir un creixement de colònies grogues no indica que sigui Staphylococcus aureus. Cal recordar que algunes soques d'Enterococcus són capaços de créixer en aquest medi i fermentar el manitol, així com certs bacils Gram positius formadors d'espores.
Per tant, és important realitzar un Gram a la colònia i una prova de catalasa.
-Per altra banda, cal considerar que altres espècies de Staphylococcus diferents a l'aureus també són capaços de fermentar el manitol. Per tant, és important sub-conrear la colònia a un brou nutrient per prendre d'allà i realitzar la prova de la coagulasa.
Entre les espècies de Staphylococcus d'importància clínica per a l'home que fermenten el manitol estan: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, entre d'altres.
Altres poden donar reacció variable, és a dir, algunes vegades positives i altres negatives. Algunes són S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, entre d'altres.
-No es recomana prendre colònies de forma directa de l'agar manitol per realitzar la prova de la coagulasa, ja que l'alta concentració de sal de l'mig pot interferir en el resultat.
-Finalment es recomana incubar les plaques sembrades de manitol salat fins durant 48 hores, a causa que algunes soques de S. aureus poden fermentar lentament el manitol, encara que això no és molt freqüent.
referències
- Laboratoris Britània. Manitol salat agar. 2015. Disponible a: britanialab.com
- «Agar manitol salat». Viquipèdia L'enciclopèdia lliure. 31 oct 2018, 19:08 UTC. 17 gen 2019, 20:55, disponible a: es.wikipedia.org.
- Köneman I, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnòstic Microbiològic. (5ta ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnòstic Microbiològic de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
- Laboratoris BD. BD Mannitol Salt Agar. 2013. Disponible a: bd.com.