AGAR PAPA DEXTROSA: FONAMENT, PREPARACIÓ I ÚS - BIOLOGIA - 2025

El agar papa dextrosa és un mitjà de cultiu nutritiu sòlid, no selectiu. En ell poden créixer espècies bacterianes i fúngiques, però el seu ús està indicat especialment per a l'aïllament de fongs filamentosos i llevats. També és conegut com a mitjà PDA per l'expressió en anglès Potato dextrose Agar.

És particularment útil per a l'aïllament de fongs fitopatògens, és a dir, aquells que afecten els vegetals. Per sembrar les mostres provinents de vegetals infectats es poden usar altres mitjans com l'agar Sabouraud o Malta- agar, però per a l'ús rutinari es prefereix l'agar papa dextrosa per obtenir-se major esporulació.

Aspergillus niger i Sinemas en agar papa dextrosa respectivament. Font: Alextrevelian 006 at English Wikipedia / Joselrojas

També és utilitzat per al recompte de colònies fúngiques en mostres de cosmètics, productes farmacèutics i alguns aliments lactis. Així mateix, és propici per sembrar mostres de raspats de pell a la recerca de dermatòfits, els quals creixen molt bé en aquest mitjà, desenvolupant les seves pigments característics.

El medi papa dextrosa és un mitjà molt senzill i fàcil de preparar al laboratori. Conté, com el seu nom indica, infusió de papa, dextrosa i agar-agar. Addicionalment poden afegir-se substàncies inhibidores per evitar el creixement bacterià i augmentar la selectivitat per a espècies de fongs.

fonament

L'agar papa dextrosa és un mitjà de cultiu que aporta els elements nutricionals necessaris per al desenvolupament de fongs filamentosos i llevats.

La combinació de la infusió de papa amb la glucosa proporciona la font d'energia perfecta perquè hi hagi un creixement satisfactori dels fongs. Mentre que l'agar és qui brinda la consistència a l'mig.

El mitjà per si sol no inhibeix el creixement dels bacteris, per tant és un mitjà no selectiu. Per fer-ho selectiu necessita l'agregat de substàncies inhibidores com l'àcid tartàric o els antibiòtics.

preparació

-Preparació casolana (no comercial) de l'agar papa dextrosa

Plaques de Petri

Es prepara de la següent manera:

En primer lloc, es renten molt bé les patates traient la terra que posseeixin. Es tallen a rodanxes fines amb tot i petxina. Es pesen 200 gr de patates i es col·loquen a bullir en un litre d'aigua destil·lada, durant mitja hora.

Acabat el temps es filtra o cola tot el preparat a través d'una gasa.

El líquid obtingut es completa amb aigua destil·lada fins arribar a un litre. A la infusió se li addicionen 20 gr d'agar-agar i 20 g de dextrosa, es barreja bé i es autoclava a 121 ° C, a 15 lliures de pressió per 15 minuts.

Deixar refredar fins a 50 ° C i servir en plaques de Petri estèrils. Les plaques preparades es conserven a la nevera.

falques

També es poden preparar falques d'agar papa dextrosa.

En aquest cas abans d'esterilitzar en l'autoclau es col·loquen de 12 a 15 ml de medi en tubs, posteriorment es autoclavan i a l'sortir se'n van a dormir en suports especials fins que solidifiqui. Desar en nevera.

El mitjà queda a un pH de 5.6 ± 0.2, però, alguns laboratoris afegeixen àcid tartàric a l'10% per baixar el pH a 3,1 ± 0.1 amb la finalitat d'inhibir el creixement bacterià.

En aquest mateix sentit, altres laboratoris prefereixen afegir antibiòtics per fer-ho selectiu per al cultiu de fongs i evitar el desenvolupament bacterià.

-Preparació comercial de l'agar papa dextrosa

Pesar 39 g de medi deshidratat disponible comercialment i dissoldre en un litre d'aigua destil·lada. Deixar en repòs per 5 minuts.

La barreja s'escalfa agitant freqüentment fins a la seva dissolució total. Posteriorment s'esterilitza en autoclau a 121 ° C durant 15 minuts.

Es poden preparar plaques o falques. Procedir com va ser descrit anteriorment.

El pH queda en 5,6 ± 0,2. Si es desitja el pH de 3,1 s'han d'agregar 14 ml d'àcid tartàric estèril a el 20% abans de servir en les plaques.

El color de l'mig sense preparar és beix i preparat és ambre clar amb un aspecte lleugerament tèrbol o opalescent.

usos

Procés per a la sembra de mostres vegetals en agar papa dextrosa

-Per a les fulles amb taques

Les fulles es tallen a trossos.

En un got de 50 cc amb alcohol a l'50% col·locar els trossos de les fulles (trossos tacats i sans), per desinfectar la superfície per 20 a 30 segons. Llençar l'alcohol i afegir hipoclorit de sodi a l'20% per 40 a 50 segons si són fulles fines i augmentar el temps a 80 segons si es tracta d'escorces i troncs.

Llençar l'hipoclorit de sodi i prendre amb una pinça estèril els trossets desinfectats i col·locar-los en la superfície de l'mig (un màxim de 10 trossos). Col · locar la data i incubar de 20 a 30 ° C.

-Per fruits i tubercles

Si la fruita és carnosa, obrir la fruita afectada pel fong i prendre trossos amb un bisturí estèril, tant de la part malalta com de la sana i col·locar-lo sobre la superfície de l'agar.

Si la fruita és cítrica, com ara una llimona o una taronja, s'ha d'obrir i sembrar les seves llavors.

Quan la superfície de la fruita està afectada i s'observen esporos, l'ideal és utilitzar el mètode de ratllat sobre la placa; aquest consisteix en tocar les espores amb una espàtula en forma de "L" esterilitzada i refredada, i posteriorment realitzar un sembrat en ziga-zaga 2 a 3 vegades sobre l'agar.

-Per grans

Es desinfecten igual que es va descriure en els fulls i posteriorment es col·loquen en l'agar.

-Per branques i tiges

Es realitza un raspat de l'escorça i posteriorment es prenen trossos de la part sana i malalta i se sembren directament sobre l'agar.

Les plaques sembrades s'incuben en aerobiosi a 20-30 ° C durant 72 hores.

Procés per a la sembra de mostres d'escates de pell, pèl o ungles sobre l'agar papa dextrosa

La presa de mostra s'ha de realitzar utilitzant un full de bisturí Nº 11, bé sigui per tallar cabell afectat, escates de la pell o ungles a la recerca de dermatòfits. Abans de prendre la mostra s'ha de desinfectar l'àrea amb alcohol a l'70%.

-Mostra de pell

En les lesions escamativas s'ha de raspar la vora de la lesió, ja que allà és més probable trobar a l'fong.

En lesions exudatives la mostra es pren amb tampó seca o humida. Sembrar immediatament sobre l'agar papa dextrosa o agar Sabouraud. Evitar mitjans de transport.

Un altre mètode de presa de mostra és a través de la tècnica de l'quadrat de moqueta de Mariat i Adan Camps. En aquest cas es frega la zona afectada 5 vegades amb un tros de llana estèril per al seu posterior cultiu.

La mostra es pot col·locar directament en el medi de cultiu.

-Mostra de pèl

Depenent de la patologia poden ser tallada la part afectada o arrencats d'arrel. Posar la mostra en el medi de cultiu.

-Mostra d'ungla

Es poden fer raspats o tallar una part específica de l'ungla afectada. Dependrà de l'tipus de lesió.

Tallar la mostra en trossets d'1 mm abans de sembrar per tal d'augmentar la probabilitat de contacte de l'fong amb el medi de cultiu.

Procediment d'identificació

Les colònies obtingudes a la placa s'aïllen en tubs que continguin agar papa dextrosa per d'allí realitzar l'estudi macroscòpic de les colònies (aspecte, color, consistència, grau de desenvolupament.

L'estudi microscòpic (observació d'estructures i les seves formacions), es pot fer per microcultius o observació directa a l'microscopi entre làmina i làmina.

Recompte de colònies

Aquest mitjà també es pot utilitzar per determinar la càrrega de fongs i llevats presents en mostres vegetals, aliments, cosmètics o fàrmacs. Amb aquesta finalitat es fa servir agar papa dextrosa suplementat amb antibiòtics, com ara: (cloramfenicol, clorotetraciclina o ambdós).

Abocar 1 ml de la mostra -preferiblement diluida- en una placa de Petri estèril i buida, posteriorment fondre un tac d'agar papa dextrosa i deixar refredar a 45 ° C. Abocar sobre la placa de Petri i rotar fins homogeneïtzar. Deixar en repòs fins que solidifiqui.

Incubar en aerobiosi a 20-25 ° C (floridures) o 30-32 ° C (llevats) per 5 a 7 dies o més, depenent de el tipus de fong que es busca i el tipus de mostra. Es poden utilitzar dues plaques per incubar en els dos rangs de temperatures.

Comptatge de colònies fúngiques en una mostra d'aliment. Agar papa dextrosa suplementat amb antibiòtics. Font: Pxhere.com photo / 777.267

Manteniment de soques de fongs

L'agar papa dextrosa pot utilitzar-se per mantenir ceps de fongs viables per diversos anys.

Per a això es conrea el fong en falques d'agar papa dextrosa i un cop crescut el fong, aquest es cobreix amb oli mineral. L'oli ha de ser esterilitzat en autoclau per 45 minuts, i tenir una viscositat aproximada de 300 a 330 Saybolt. L'oli ha de sobrepassar d'1 a 2 cm de la punta de l'bisell.

Control de qualitat

De cada lot preparat s'ha de prendre 1 o 2 plaques i incubar-a 25 ° C per 48 hores o 20 ° C per 96 hores. Un bon control d'esterilitat és aquell en el qual no s'observa desenvolupament de colònies.

També es poden fer servir ceps controls conegudes o certificades com ara:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. En tots els casos s'espera un bon creixement.

referències

1. Laboratoris Britània. Papa glucosat agar. 2015. Disponible a: britanialab.com
2. Laboratoris Neogen. Potato dextrose agar. Disponible a: foodsafety.neogen.com
3. Laboratori Insumolab. Agar papa dextrosa. Disponible a: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnòstic Microbiològic de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
5. Cases-Racó G. Micologia General. 1994. 2n Ed. Universitat Central de Veneçuela, Edicions de biblioteca. Veneçuela, Caracas.
6. Aceituno M. Avaluació de la Qualitat Microbiològica en Ombra d'Ulls, Tipus Pols Compacte d'un Laboratori de Producció Nacional, segons Mètode de Referència Pharmacopea Usp 2005. Tesi per optar a l'títol de Químic Farmacèutic. Universitat de Sant Carlos de Guatemala.
7. Cuétara M. Processament de les mostres superficials. Revista Iberoamericana de Micologia. 2007; pp. 1-12