AGAR NUTRITIU: FONAMENT, PREPARACIÓ I USOS - BIOLOGIA - 2025

L' agar nutritiu és un mitjà de cultiu sòlid no selectiu i no diferencial. En aquest mitjà creixen tota mena de bacteris no exigents des del punt de vista nutricional.

És un mitjà simple i, malgrat el seu nom, conté un valor nutritiu més baix en comparació amb altres mitjans similars, com ara l'agar infusió cervell cor o l'agar soja tripticasa.

Comptatge de colònies en agar nutritiu

La seva utilitat en el laboratori és molt variada. Principalment serveix per al subcultiu d'espècies, manteniment de soques, comptatge de colònies, com a base per preparar agar sang, entre d'altres.

Així mateix, pel seu color beix clar poden distingir-se de manera excepcional la producció de pigments generats per algunes soques bacterianes, com ara el pigment verdós de Pseudomonas aeruginosa, el pigment vermell maó produït per Serratia marcescens a temperatura ambient, el pigment groc daurat de Staphylococcus aureus, entre d'altres.

A més, és un dels mitjans de cultiu més econòmics que es troben al mercat.

fonament

Com ja es va esmentar anteriorment, és un mitjà molt simple que es basa en proporcionar substàncies nutritives per al creixement bacterià sense restricció i sense reaccions complexes d'interpretar.

Com el mitjà és translúcid, és ideal per explicar colònies pel mètode de sembrat per profunditat.

composició

Està compost principalment d'extracte de carn o extracte de llevat, peptones o digest pancreàtic de gelatina, agar-agar, clorur de sodi i aigua destil·lada.

L'extracte de carn o de llevats i les peptones representa les fonts de carboni i minerals essencials (nitrogen, fòsfor i sofre), que seran utilitzats pels bacteris com a font d'energia i factors de creixement.

Així mateix, l'agar-agar és la base de tots els mitjans sòlids de cultiu, venint a substituir la gelatina, que va ser el primer compost base utilitzat per Robert Koch per donar-li consistència sòlida als seus mitjans.

L'agar és un polisacàrid compost per galactosa, galactomanà, agarosa i agaropectina. Es qualla a 40 ° C i es fon proper als 100 ° C.

Per la seva banda, el clorur de sodi brinda a l'mig la osmolaritat necessària per al desenvolupament bacterià.

Finalment, l'aigua serveix per hidratar i dissoldre els compostos liofilitzats. S'ha d'utilitzar aigua destil·lada ajustada a pH neutre. No s'ha d'utilitzar aigua corrent perquè conté calci i magnesi que poden reaccionar amb els fosfats de l'mig i formar sals insolubles.

preparació

Per a un litre d'agar nutritiu s'ha de pesar 31 g de medi deshidratat. Es col·loca en una fiola i es dissol en un litre d'aigua destil·lada. Després de 5 minuts de repòs, s'escalfa sobre una font de calor i es barreja constantment fins que bulli per 1 o 2 minuts.

Preparació de medi de cultiu.

Després es col·loca la fiola en un autoclau i s'esterilitza a 121 ° C per 20 minuts.

Esterilització en autoclau

Culminat el temps es treu de l'autoclau i se serveix en plaques de Petri estèrils, utilitzant per a això una campana de flux laminar o l'encenedor de Bunsen.

Si les plaques de Petri són un sol ús (plàstiques) el medi s'ha de distribuir quan l'agar tingui una temperatura aproximada de 50 ° C, per evitar que les mateixes es deformin per la calor excessiva.

Deixar solidificar i guardar en un portaplacas de forma invertida i refrigerar a la nevera a 2-8 ° C fins al seu ús.

Les plaques han de temperar abans de ser sembrades. Les plaques d'agar nutritiu no s'han d'utilitzar si estan contaminades o deshidratades.

El pH de l'mig preparat ha de quedar ajustat a 7,3 ± 0,2.

usos

És el mitjà de cultiu més senzill que s'utilitza en el laboratori de microbiologia. La seva formulació és excel·lent per al creixement dels bacteris no exigents.

Els seus principals usos s'expliquen a continuació:

Com a base per a la preparació d'agar sang

Aquest mitjà de vegades és usat com a base per preparar agar sang, però no és la base més comunament utilitzada.

Estimular la esporulació de bacteris formadors d'espores

Aquest mitjà de cultiu és especialment útil per estimular l'esporulació de bacteris formadors d'espores com el Bacillus sp.

Per a això es sembra una soca de l'gènere Bacillus i es cova per 24 hores a 37 ° C a aerobiosi. Un cop crescudes les colònies se sotmet la placa a un estrès per temperatura, és a dir, s'augmenta la temperatura de l'estufa a 44 ° C i es deixa per 24 hores més o s'introdueix en un refrigerador per 24 hores.

A l'culminar el temps es realitzen estesos de l'cultiu i es tenyeixen amb tinció de Gram o amb tinció d'espores Shaeffer-Fulton. En ells s'han d'observar els bacils amb endòspores (espores dins el bacil) i exosporas (espores fora de l'bacil).

Manteniment de ceps

Alguns laboratoris d'investigació o de suport a la docència universitària requereixen mantenir viables bacteris d'importància clínica pel major temps possible, amb la finalitat d'utilitzar el banc de bacteris (bacterioteca) per a treballs d'investigació o per a la preparació de pràctiques docents, on els estudiants aprendran a manipular i identificar a aquests microorganismes.

L'agar nutritiu, així com l'agar infusió cervell cor, poden ser utilitzats amb aquesta finalitat. Es prepara l'agar, s'aboca en tubs amb tapa de baquelita i s'inclinen sobre una base, de tal manera que l'agar se solidifiqui formant un tac a el fons i un bisell en la superfície (pic de flauta).

Cada tub es retola col·locant el nom del bacteri que serà sembrada i la data. Sobre el bisell es sembrarà cadascuna de les bacteris i s'incubaran per 24 hores, un cop crescudes les colònies els tubs es guarden a temperatura ambient.

La bacterioteca ha de ser renovada d'1 a 3 mesos, per evitar la contaminació i deshidratació de l'mig i així com la mort dels bacteris.

Només poden mantenir d'aquesta manera els bacteris no exigents.

Comptatge de colònies

Encara hi ha mitjans especialitzats per al comptatge de colònies, com l'agar compte estàndard, l'agar nutritiu pot ser usat per a aquest fi, bé sigui per sembrat en superfície amb espàtula de drigalski o per profunditat. Per això és molt útil en l'anàlisi microbiològic d'aliments i d'aigües.

Execució de proves diagnòstiques

A causa de que és un mitjà que no conté sang, ni cap altre additiu, és ideal per prendre colònies crescudes en aquest mitjà per realitzar la prova de catalasa.

Així mateix, pel seu color clar és indicat per a realitzar proves de oxidasa directament sobre una àrea de l'agar sembrat, sense que hi hagi interferència.

Recuperació d'aerobis mesòfils d'aigües salades recreacionals (Platges)

L'agar nutrient preparat amb aigua de mar a l'10% és útil per a l'avaluació d'aerobis mesòfils en aigües de platges.

D'aquesta manera, es pot apreciar el nivell de contaminació real que tenen les aigües amb aquests microorganismes, ja que en aquest tipus de mostres dels resultats es veuen solapats quan s'usen mitjans de cultius preparats de la manera convencional.

Això va ser demostrat per Cortez i cols. el 2013 en un treball d'investigació.

Això és explicable a causa de el canvi brusc que pateixen els bacteris a el passar d'un ambient hipersalado a un ambient baix en sal, per tant els microorganismes entren en un estat de letargia en què es troben viables, però no cultivables.

referències

1. «Agar nutritiu.» Viquipèdia L'enciclopèdia lliure. 13 set 2016, 20:33 UTC. 29 desembre 2018, 21:04 es.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnòstic Microbiològic de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
3. Köneman I, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnòstic Microbiològic. (5ta ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
4. Cortez J, Ruiz I, Medina L, Valbuena O. Efecte de mitjans de cultiu preparats amb aigua de mar sobre indicadors sanitaris en aigües marines de balnearis de Chichiriviche, estat Falcón, Veneçuela. Rev Soc Vine microbiol 2013; 33: 122-128
5. Parets V, Dies V, Silva d'Almeida M i Cardoso M. Qualitat Microbiològica de l'aigua per Dosi Inseminantes, per suinos. Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
6. García P, Parets F, Fernández de el Barri M. (1994). Microbiologia clínica pràctica. Universitat de Cadiz, 2a edició. Servei de Publicacions UCA.