El agar Hektoen o agar Hektoen entèric és un mitjà de cultiu sòlid, selectiu i diferencial. Va ser creat a l'Institut Hektoen per King i Metzger per a l'aïllament de bacteris enteropatògenes dels gèneres Shigella i Salmonella.
El mitjà està compost per proteosa peptona, extracte de llevat, sals biliars, lactosa, sacarosa, salicina, tiosulfat de sodi, clorur de sodi, citrat de ferro, citrat d'amoni, blau de bromotimol, fucsina àcida i agar. Aquesta formulació permet diferenciar els gèneres Shigella i Salmonella de la resta dels bacteris capaços de créixer en aquest mitjà.
A. Agar Hektoen verge B. Agar Hektoen sembrat. Font: Flickr.com/The original uploader was Philippinjl at French Wikipedia.
Encara que existeixen altres mitjans amb la mateixa funció que l'agar Hektoen, aquest presenta major avantatge en comparació a altres mitjans, especialment quan es volen recuperar espècies de Shigella.
Les espècies d'ambdós gèneres produeixen problemes gastrointestinals severs en l'ésser humà pel consum d'aliments contaminats; per tant la transmissió és fecal - oral. És per això que l'ús de l'agar Hektoen està principalment indicat en l'anàlisi microbiològic de mostres de femta i aliments.
fonament
L'agar Hektoen conté peptones i extracte de llevat com a font de nutrients, proporcionant els elements essencials per al desenvolupament microbià.
No obstant això, també posseeix sals biliars que actuen inhibint el creixement d'alguns bacteris, especialment Gram positives i algunes Gram negatives. És per aquest motiu que es considera un medi selectiu.
D'altra banda, l'agar Hektoen és un mitjà diferencial. Aquesta propietat és conferida per la presència de carbohidrats fermentables com la lactosa, la sacarora i la salicina, al costat de el sistema indicador de pH, representat pel blau de bromotimol i la fucsina àcida.
Totes els bacteris capaços de créixer en aquest mitjà que no pertanyin a l'gènere Salmonella i Shigella desenvoluparan colònies de color salmó o taronja a excepció de l'gènere Proteus. Això es deu a la fermentació d'un o diversos dels carbohidrats presents, la qual cosa acidifica el medi, el que fa virar a l'indicador de pH.
Per la seva banda, el gènere Shigella i Salmonella no són capaços de fermentar a cap dels carbohidrats presents, utilitzant únicament a les peptones com a font d'energia, el que alcalinitza el medi i per això les seves colònies són verd-blavoses.
També en aquest mitjà es poden distingir els bacteris capaços de formar sulfur d'hidrogen (gas incolor). El tiosulfat de sodi actua com a font de sulfur mentre que el citrat de ferro és l'agent revelador. Tots dos compostos fan possible la formació d'un precipitat negre de sulfur de ferro que evidencia la reacció.
El precipitat negre al centre de la colònia amb un halo transparent al voltant dona un aspecte d'ull de peix. Aquesta característica suggereix la presència de l'gènere Salmonella.
Finalment, el clorur de sodi manté l'equilibri osmòtic i l'agar brinda la consistència sòlida a l'mig.
preparació
Pesar 76 g de medi deshidratat i dissoldre en un litre d'aigua destil·lada. Agitar vigorosament la barreja i després es deixa en repòs per 10 a 15 minuts. Es pot escalfar i bullir, donant moviments rotatoris fins a la seva dissolució total. Aquest mitjà no s'esterilitza en autoclau.
Quan el mitjà arribi a una temperatura aproximada de 45 ° C s'aboca de manera directa un volum de 20 ml en plaques de Petri estèrils.
Es deixa solidificar l'agar. En aquest moment ja estan llestes per al seu ús. És recomanable utilitzar-les de forma immediata. Si no és possible es guarden a la nevera fins al seu ús.
Les plaques s'han de treure anticipadament de la nevera abans de sembrar-les perquè prenguin temperatura ambient.
El pH de l'mig ha de quedar en 7,5 ± 0,2. El color de l'mig deshidratat és color porpra i preparat és verd marronós.
ús
Es recomana l'ús de l'agar Hektoen per a la recerca de bacteris de l'gènere Shigella i Salmonella en mostres de femta i aliments.
Es augmenta considerablement la possibilitat d'aïllar aquests bacteris si prèviament s'enriqueix la mostra en brous especials, com ara brou selenita, brou selenito cistina, brou tetrationat, etc.
El inòcul ha de ser forta i la sembra es realitza per estriació. Les plaques s'incuben a 37 ° C per 24 a 48 hores en aerobiosi.
Es recomana la incubació per 48 hores a causa de que les característiques de les colònies són més clares per a la seva interpretació i diferenciació en aquest temps.
Control de qualitat
Per realitzar el control de qualitat a aquest mitjà s'usen soques bacterianes certificades, com ara: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 i Shigella sonnei ATCC 25931.
Els resultats esperats són els següents: Salmonella typhimurium i Salmonella enteritidis han de desenvolupar colònies color verd - blavoses amb o sense centre negre. En tant que les espècies de Shigella creixeran com colònies color verd - blavoses.
També es poden incloure soques d'Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700.603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.
En aquests casos les característiques observades són les següents: I. coli i K. pneumoniae desenvoluparan en aquest mitjà colònies color salmó a taronja, amb un precipitat de el mateix color voltant. Com a, Proteus desenvoluparà colònies blau-verdós amb o sense centre negre.
Mentre que S. aureus i E. faecalis han de ser inhibits, de vegades E. faecalis aconsegueix créixer com a colònies grogues, molt petites.
D'altra banda, pel fet que aquest mitjà no s'esterilitza en autoclau és important avaluar l'esterilitat de l'mig. Per això, de cada lot preparat s'han de covar d'una a dues plaques sense inocular a 37 ° C per 24 hores en aerobiosi.
Òbviament s'espera que no hi hagi creixement de cap tipus sobre la placa.
limitacions
-Les espècies de Proteus poden desenvolupar-se en aquest medi i les característiques de les seves colònies es poden confondre amb espècies de Salmonella o Shigella. És per això que tota colònia sospitosa ha de confirmar amb proves bioquímiques.
-És necessari acompanyar l'ús d'aquest mitjà amb altres agars menys selectius, pel fet que si el microorganisme buscat es troba en baixes concentracions pogués no desenvolupar-se en aquest mitjà.
-No sobreescalfar durant la seva preparació, ja que la calor excessiva altera la composició de l'mig.
-Inusualmente poden aparèixer colònies de Salmonella fermentadors de lactosa que poden passar desapercebudes.
referències
- Wikipedia contributors. Hektoen entèric agar. Viquipèdia The Free Encyclopedia. March 13, 2019, 23:38 UTC. Disponible a:.wikipedia.org / Accessed March 16, 2019.
- Laboratoris BD. BD Hektoen entèric Agar (HE Agar). 2013. Disponible a: bd.com
- Laboratoris Britània. Hektoen Entèric Agar. 2015. Disponible a: britanialab.com
- Laboratoris Difco Francisco Soria Melguizo. Agar Hektoen agar. Disponible a: f-soria.es
- Difco & BBL Manual, Hektoen entèric Agar. 2nd Edition. Disponible in: bd.com/europe