AGAR FARINA DE BLAT DE MORO: FONAMENT, PREPARACIÓ I ÚS - BIOLOGIA - 2025

El agar farina de blat de moro és un mitjà de cultiu sòlid, de baix poder nutricional, útil per al sub-cultiu de certs fongs i per a la demostració de clamidosporos en soques de el complex Candida albicans. En anglès es coneix com Corn Meal Agar.

El mitjà farina de blat de moro convencional té una composició molt simple, conté farina de blat de moro, agar-agar i aigua. Pel seu baix nivell nutricional és ideal per utilitzar en el manteniment de soques fúngiques per moderats períodes de temps, especialment de fongs negres.

A. Representació gràfica de l'Complex Candida albicans en agar farina de blat de moro. B. clamidosporas de l'Complex Candida albicans vista a l'microscopi, formades en agar farina de blat de moro. Font: A. GrahamColm / B. By: CDC / Dr. William Kaplan, Courtesy Public Health Image Library.

La esporulació de el complex Candida albicans es veu afavorida en aquest mitjà, si se li addiciona 1% de Tween 80 durant la preparació de l'agar. La formació de clamidosporas és característic d'aquesta espècie i pràcticament l'única que afecta l'ésser humà.

Hi ha altres espècies que formen clamidosporas, però és poc probable que afectin l'humà, com ara Candida australis, present a l'excrement de pingüins, o C. clausenii, que és un sapròfit poques vegades trobat. Així mateix, excepcionalment les espècies C. stellatoidea i C. tropicalis podrien formar-les.

D'altra banda, l'addició de glucosa a l'mitjà farina de blat de moro afavoreix la formació de pigments en soques de Trichophytom rubrum.

És important destacar que hi ha fongs que no formen hifes, ni pseudohifas en agar farina de blat de moro, com ara Cryptococcus neoformans, diferenciant-se d'altres gèneres.

L'agar farina de blat de moro pot preparar casolanament en el laboratori o també es poden utilitzar mitjans comercials.

fonament

La farina de blat de moro és el substrat, l'agar és l'agent solidificant i l'aigua és el dissolvent.

L'agar farina de blat de moro pot ser suplementat amb tween 80 (polièster 80 de sorbitan monooleat o polisorbat). Aquest compost disminueix la tensió superficial de l'mig pel seu poder emulsificante.

A més crea un ambient hostil que inhibeix la multiplicació cel·lular exagerada i estimula el creixement d'hifes, afavorint també la producció de clamidosporas; aquestes últimes considerades estructures de resistència. Aquesta estructura ajuda en la identificació de l'espècie de Candida albicans.

Per la seva banda, la glucosa en aquest mitjà augmenta la capacitat de formació de pigments d'alguns fongs.

Cal destacar que el mitjà farina de blat de moro amb glucosa no serveix per a la demostració de clamidosporas al c omplejo Candida albicans.

preparació

Preparació casolana de l'agar farina de blat de moro

Pesar 47 g de farina de blat de moro groc i dissoldre en 500 ml d'aigua destil·lada. Escalfar a 60 ºC, mentre s'agita la preparació en un període aproximat d'1 hora. Després filtrar a través d'un tros de gasa i cotó, opcionalment es pot tornar a filtrar passant la preparació per un paper de filtre Whatman N º 2.

Completar el volum a 1000 ml amb aigua destil·lada. Addicionar 17 gr d'agar-agar, escalfar fins dissoldre. Autoclavar per 15 minuts a 121 ºC.

Servir en plaques de Petri estèrils. Desar en nevera.

El color de l'medi preparat és blanquinós amb aspecte grumollós.

Si es desitja preparar farina de blat de moro amb glucosa a la preparació abans descrita afegir 10 g de glucosa.

Agar farina de blat de moro comercial

Pesar 17 g de medi deshidratat i dissoldre en 1 litre d'aigua destil·lada. Es pot escalfar la mescla, agitant suaument per dissoldre completament. Esterilitzar en autoclau a 121 ºC, a 15 lb, per 15 minuts.

Abocar en plaques de Petri estèrils. Deixar solidificar. Invertir i guardar a la nevera fins al seu ús. Temperar abans d'utilitzar.

El pH ha de quedar en 6,0 ± 0,2 a 25 ° C.

Agar farina de blat de moro amb Tween 80

Per complir amb la norma ISO 18416 s'ha de preparar l'agar farina de blat de moro de la següent manera:

Pesar 65 gr per litre i afegir 10 ml de Tween 80. Escalfar i bullir per pocs minuts fins dissoldre, tenint cura de no sobreescalfar massa. Esterilitzar a 121 º C per 15 minuts.

Agar farina de blat de moro amb glucosa

Per millorar el poder cromogènic de les colònies de Trichophyton rubrum i diferenciar-les de T. mentagrophytes, es pot addicionar 0,2% de glucosa a la fórmula original. No necessita tenir Tween 80, ja que la glucosa inhibeix la formació de clamidosporas.

ús

Principalment l'ús de l'agar farina de blat de moro està destinat a l'estudi de soques de Candida, ajudant a la seva identificació a través de l'observació característica de les clamidosporas en l'espècie albicans. És a dir, l'ús d'aquest agar serveix com a mètode auxiliar d'identificació d'aquestes llevats.

En aquest agar poden desenvolupar-se tant espècies sapròfits com patògens, però cada una forma estructures miceliales característiques. Per exemple, espècies de l'gènere Torulopsis no produeixen miceli i es reprodueixen només per blastoconidios.

Així mateix, les espècies Trichosporon i Geotrichum produeixen artroconidias en agar farina de blat de moro i algunes vegades és difícil de distingir entre una i altra.

Els artroconidios de l'gènere Geotrichum produeixen una extensió de les hifes assemblant un pal d'hoquei.

També la producció de pigments utilitzant l'agar farina de blat de moro suplementat amb glucosa és útil en la identificació de Trichophytom rubrum.

sembrat

En l'agar farina de blat de moro es subcultivan les colònies sospitoses de Candida obtingudes en el medi de cultiu primari -agar Sabouraud-, provinents de mostres clíniques, cosmètics, terres, entre d'altres. El medi es sembra i s'incuba a 22 ºC per 24 a 48 hores. Pot allargar-se el temps d'incubació si cal.

Demostració de clamidosporas

Amb aquesta finalitat l'agar farina de blat de moro amb Tween 80 ha inocular utilitzant la tècnica de Dalmau. Aquest mètode consisteix a prendre amb la nansa de platí una porció de la colònia sospitosa i fer tres talls paral·lels en el medi mantenint la nansa a 45º. Els talls han d'estar separats a una distància d'1 cm entre un i altre.

Posteriorment es col·loca un cobreix-objecte prèviament flamejat sobre les estries sembrades, de tal manera que quedi la meitat coberta i l'altra descoberta.

Incubar les plaques sembrades a 30 ° C durant 48-72 hi després examinar a el microscopi a través del cobreix-objectes.

Manteniment de ceps fúngiques

Per al manteniment de soques les plaques sembrades i crescudes es guarden a la nevera (4 a 8 ºC). D'aquesta manera poden durar diverses setmanes i ser utilitzades amb fins de docència o investigació.

Control de qualitat

Per al control d'esterilitat s'incuba una placa sense inocular a temperatura ambient, s'espera que no hi hagi creixement, ni canvi de color.

Per al control de qualitat es poden sembrar ceps conegudes com ara: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Els resultats esperats són inhibició parcial per S. aureus i E. coli. En tant que s'espera un creixement satisfactori en la resta dels ceps.

Aspergillus niger creix amb colònies de color negre i esporulades en un temps aproximat de 5 dies d'incubació.

Candida albicans colònies levaduriformes amb producció de clamidosporas.

Saccharomyces cerevisiae produeixen cèl·lules levaduriformes grans.

limitacions

En el fons de la placa es forma un precipitat groc que no s'ha de confondre amb colònies.

referències

1. Laboratoris Neogen. Corn Meal Agar. Disponible a: foodsafety.neogen.com.
2. Microkit Mitjans de Conreu. Corn Meal Agar. Disponible a: medioscultivo.com.
3. Linares M, Solís F. Guia Identificació de llevats. Disponible a: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Salut Pública, 2002; 19 (4): 206-208. Disponible a: Scielo.com
5. Cases-Racó G. Micologia General. 1994. 2n Ed. Universitat Central de Veneçuela, Edicions de biblioteca. Veneçuela, Caracas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnòstic Microbiològic de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
7. Köneman I, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnòstic Microbiològic. 5ta ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
8. Castell E. Estudi comparatiu d'alguns mètodes macro i microscòpics per a l'aïllament i reconeixement de l'gènere Candida. Rev. Colombiana de Ciències Químic farmacèutiques. 1970; 3 (1): 33-57. Disponible a: ciencias.unal.edu.co