L' agar EMB és un mitjà de cultiu sòlid selectiu i diferencial utilitzat per a l'aïllament de bacils Gram negatius, principalment de la família Enterobacteriaceae, i altres bacils Gram negatius no exigents. També se li coneix amb les sigles EAM, que significa eosina-blau de metilè.
Aquest mitjà va ser creat per Holt-Harris i Teague en 1916. Conté peptona, lactosa, sacarosa, fosfat dipotàssic, agar, eosina, blau de metilè i aigua. És molt similar a l'agar MacConkey, sobretot si es fa servir l'agar EMB modificat per Levine, que no conté sacarosa.
Lluentor metàl·lica d'Escherichia coli en agar EMB Font: Carmen Moreno González, from Wikimedia Commons
De fet, cada laboratori decideix si treballa amb un o amb un altre, ja que compleixen la mateixa funció, encara que bioquímicament siguin diferents.
Fins i tot presenta el mateix inconvenient que l'agar MacConkey clàssic pel que fa a la producció de swarming pel gènere Proteus. Per tant, per evitar aquest fenomen es pot augmentar la concentració de l'agar fins a un 5%.
fonament
selectiu
L'agar EMB és subtilment selectiu perquè conté els colorants anilínicos (eosina i blau de metilè), els quals actuen com a inhibidors, impedint el creixement de la majoria dels bacteris Gram positives i d'alguns bacils Gram negatius exigents.
No obstant això, aquest agar té l'inconvenient que alguns bacteris Gram positives poden resistir la presència de les substàncies inhibidores i créixer com petites colònies puntiformes incolores, tal com el Enterococcus faecalis i alguns Staphylococcus.
També poden créixer certes llevats, com el complex Candida albicans, que donarà colònies rosades molt petites. Fins i tot es poden desenvolupar clamidosporas a partir d'aquest llevat si la mostra és sembrada per profunditat.
diferencial
D'altra banda, l'agar EMB també és un mitjà diferencial, ja que aquests colorants junts (eosina i blau de metilè) tenen la propietat de formar un precipitat en pH àcid, per tant serveixen com a indicadors de la producció de la mateixa.
Per això, els bacteris feblement fermentadors de lactosa o sacarosa produeixen colònies de color porpra en 24 a 48 hores. Per exemple els gèneres Klebsiella, Enterobacter i Serratia.
Aquelles bacteris que fermenten fortament la lactosa, com Escherichia coli, o la sacarosa, com Yersinia enterocolítica o Proteus penneri, formen un precipitat negre verdós, donant un aspecte de lluentor metàl·lica característic en aquestes espècies.
Cal destacar que si es fa servir el medi EMB levine (sense sacarosa), Yersinia enterocolítica i Proteus penneri produiran colònies transparents.
Els bacteris que no fermenten la lactosa ni la sacarosa es nodreixen per la presència de peptones, que proporcionen els aminoàcids i el nitrogen necessari per al desenvolupament bacterià, i produeixen colònies transparents. Per exemple, els gèneres Salmonella i Shigella, entre d'altres.
Així mateix, és important destacar que el gènere Acinetobacter pot presentar colònies de color blau lavanda, tot i que no és fermentador de lactosa, ni sacarosa, però tenen la propietat de fixar el blau de metilè en la seva paret cel·lular. Això també pot succeir amb altres bacteris oxidatives.
preparació
El medi original deshidratat és de color beix clar.
Per preparar aquest mitjà de cultiu s'han de tot 36 grams de el medi deshidratat i suspendre'l en una fiola que contingui un litre d'aigua destil·lada.
Després de deixar la barreja 5 minuts en repòs, portar la fiola a una font de calor, barrejant de forma vigorosa i constant fins que bulli i s'aconsegueixi dissoldre totalment.
Posteriorment, s'ha de esterilitzar el medi de cultiu ja dissolt utilitzant l'autoclau a 121 ° C durant 15 minuts.
Acabat el temps, es treu de l'autoclau i es deixa reposar breument. Després es serveix encara calent (45 - 50 ° C) entre 15 a 20 ml d'agar en cada placa de Petri estèril. El medi ha de ser blau tornassol.
Després de servides les plaques es deixen lleugerament destapades fins que l'agar refredi una mica. Després es tapen i es deixa que solidifiquen completament. Posteriorment s'ordenen en porta plaqueros en forma invertida i es guarden a la nevera (8 ° C) fins al seu ús.
Aquest procediment es realitza preferiblement en una campana de flux laminar o davant de l'encenedor de Bunsen per evitar que es contaminin.
És important tenir present que cada casa comercial indicar la quantitat tot per preparar el medi de cultiu.
El pH final de l'mig ha de ser de 7.2 ± 0.2
usos
Aquest mitjà s'utilitza per sembrar orina i femta o qualsevol tipus de mostres clíniques, especialment si es sospita de la presència de bacils Gram negatius no exigents, com els bacils pertanyents a la família Enterobacteriaceae, que creix molt bé en aquest mitjà.
Els bacteris enteropatògenes dels gèneres Shigella i Salmonella es distingeixen per les seves colònies incolores o lleugerament ambre.
També creixen altres bacils no fermentadors de lactosa com Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, entre d'altres.
Així mateix, aquest mitjà és molt útil en l'anàlisi microbiològic d'aliments i aigües, ja que és ideal per a la fase completa confirmatòria de la determinació de coliformes, és a dir, per corroborar la presència d'E coli a partir de brous EC tèrbols, provinents de la tècnica de l'nombre més probable (NMP).
Control de qualitat
Per verificar que el medi de cultiu acabat de preparar funciona bé, es poden sembrar ceps controls per observar les característiques de les colònies i constatar que donin acord amb el que s'esperava.
Per a això, es poden fer servir ceps ATCC o ceps ben identificades d'E coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa i alguns bacteris Gram positives, com S. aureus.
S'espera que E. coli generi colònies ben desenvolupades color negre blavós amb lluentor metàl·lica verda. Com a, Enterobacter aerogenes i Klebsiella sp han de donar colònies mucoses ben desenvolupades color negre blavós.
Per la seva banda, Salmonella typhimurium i Shigella flexneri, han de desenvolupar colònies grans, incolores o amb un lleuger color ambre.
Finalment el gènere Pseudomonas aeruginosa creix com colònies incolores de mida irregular, mentre que els bacteris Gram positives haurien de ser inhibides totalment o créixer de forma escassa amb colònies molt petites.
consideracions finals
Algunes vegades l'esterilització fa que el blau de metilè es redueixi, observant un mitjà color taronja. Perquè el blau de metilè s'oxidi i es recuperi el color porpra s'ha de barrejar suaument fins a recuperar el color.
També, després de l'esterilitzat pot precipitar el colorant, per la qual cosa s'ha de barrejar bé abans de servir a les plaques de Petri.
referències
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B i Velázquez O. 2009. Tècniques per a l'Anàlisi Microbiològic d'Aliments. 2ª ed. Facultat de Química, UNAM. Mèxic.
- Carranza C, Lleó R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Caracterització i Distribució de Ceps d'Escherichia coli potencialment patògens aïllades de Pollastres Broiler d'Explotacions Avícoles al Perú. Rev. investig. vet. Perú 2012 23 (2): 209-219. Disponible a: scielo.org.
- Laboratoris Conda SA Agar Eosina i Blau de Metileno. 2010. Disponible a: condalab.com
- Laboratoris Britània. Levine EMB (Amb Eosina i Blau de Metileno) 2011. Disponible a: britanialab.com
- Laboratoris BD. BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), Modified. 2013. Disponible a: bd.com
- Köneman I, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnòstic Microbiològic. (5ta ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnòstic Microbiològic de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA