AGAR CZAPEK: FONAMENT, PREPARACIÓ, USOS I LIMITACIONS - BIOLOGIA - 2025

El agar Czapek (CZA) és un mitjà de cultiu sòlid selectiu especialment dissenyat per al cultiu de bacteris i fongs sapròfits. Va ser creat pel botànic Friedrich Johann Franz Czapek, d'origen polonès, i el químic nord-americà Arthur Wayland Dox; per això a aquest agar també se li coneix com a mitjà Czapek-Dox.

El medi original era líquid, però posteriorment se li va agregar agar per fer-ho un mitjà sòlid. El medi Czapek està compost per nitrat de sodi, fosfat bipotásico, sulfat de magnesi, clorur de potassi, sulfat ferrós, sacarosa, agar i aigua destil·lada.

Agar Czapek A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Font: A. Medmyco / B. Photo: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

El pH de l'agar Czapek és de 7.3, però hi ha una variant a el qual se li afegeix àcid làctic a l'10% el seu pH queda en 3,5. Aquest mitjà àcid s'utilitza per al cultiu de microorganismes acidòfils.

D'altra banda, algunes cases comercials van modificar la composició de l'agar Czapek canviant el sulfat de magnesi i el fosfat bipotásico per glicerofosfato; aquesta modificació evita que es formi el precipitat de fosfat de magnesi observat amb la fórmula convencional. Així mateix, hi ha una altra variant a la qual se li afegeix extracte de llevat.

Finalment, l'agar Czapek és recomanat per l'Associació Americana de Salut Pública APHA per a l'estudi de actinomicets sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp i Penicillium sp. Aquestes espècies es caracteritzen per ser microorganismes ambientals i patògens oportunistes.

fonament

Aquest mitjà conté sacarosa; aquest carbohidrat serveix com a font de carboni, mentre que el nitrat de sodi és la font de nitrogen, però a diferència d'altres mitjans el nitrogen proporcionat és de tipus inorgànic.

Per aquest motiu el medi Czapek es considera selectiu, pel fet que només podran desenvolupar microorganismes capaços d'utilitzar compostos inorgànics com a única font de nitrogen.

Com substància reguladora de la osmolaritat de l'mig hi ha el fosfat bipotásico. Per la seva banda, el sulfat de magnesi, el clorur de potassi i el sulfat ferrós aporten minerals essencials per al creixement dels microorganismes sapròfits (de vida lliure). Amb aquesta fórmula es forma un precipitat de fosfat de magnesi.

Finalment, l'agar-agar és el compost que li proporciona la consistència sòlida a l'mig i l'aigua és el dissolvent de tots els components.

Amb la fórmula de l'agar Czapek modificat no hi ha formació de precipitat i millora el rendiment en el creixement d'alguns fongs.

L'acidesa extrema d'l'agar Czapek àcid fa que aquest sigui un mitjà més selectiu, permetent només el creixement de microorganismes acidòfils, capaços d'utilitzar el nitrogen inorgànic. Com a, l'agar Czapek-llevat millora el rendiment de certs fongs.

preparació

Medi Czapek-Dox

Pesar 49 g de el mitjà de cultiu deshidratat i dissoldre en aigua destil·lada. Aplicar calor fins bullir. Agitar la barreja freqüentment fins dissoldre completament.

-Cuñas d'agar Czapek

Distribuir la barreja dissolta en tubs i autoclavar a 121 ° C per 15 minuts. A l'treure de l'autoclau, homogeneïtzar abans de ficar al llit dels tubs i deixar solidificar.

-Plaques d'agar Czapek

Autoclavar la barreja dissolta a 121 ° C per 15 minuts i a l'sortir deixar refredar a 50 ° C, homogeneïtzar i abocar 20 ml en plaques de Petri estèrils. Deixar solidificar, invertir i guardar a la nevera fins al seu ús.

El pH ha de quedar en 7,3 ± 0,2. El color de l'mig deshidratat és blanc i preparat és ambre clar, lleugerament tèrbol per la presència d'un precipitat floculant.

Medi Czapek a pH àcid

Preparar com ja va ser descrit, però addicionant 10 ml d'àcid làctic estèril a l'10% per cada litre de mig preparat. El medi Czapek modificat ha de quedar a pH 3,5 ± 0,2.

Medi Czapek modificat

Pesar 45,4 gr de el medi deshidratat i dissoldre en 1 litre d'aigua. La resta de la preparació és igual a la descrita anteriorment. El color de l'mig deshidratat és blanc i preparat és de color blanquinós. El pH final de l'mitjà és de 6,8 ± 0,2.

Medi Czapek-llevat

També anomenat agar Czapek-extracte de llevat (CYA). Conté els elements de l'agar Czapek clàssic més extracte de llevat.

ús

El medi Czapek s'usa per buscar microorganismes sapròfits en mostres de sòl, vegetals, grans, aire, insectes, entre d'altres.

L'agar Czapek a pH àcid es fa servir per al creixement de microorganismes acidòfils, mentre que l'agar Czapek modificat és especialment útil per a la formació d'clamidosporas en espècies de l'complex Candida albicans.

Finalment, l'agar Czapek -levadura és molt útil per a l'aïllament d'Aspergillus i Penicillium.

sembrat

-Agar Czapek

Per a buscar actinomicets a terra es procedeix de la següent manera: es tracta la mostra amb aigua fenolizada per 30 min i posteriorment es sembra 1 mL de la suspensió en l'agar Czapek. Es incuba a 28 ° C per 5 a 7 dies.

Per a mostres de vegetals, grans i insectes es col·loquen directament sobre l'agar. També es poden fer dilucions i sembrar 0,1 ml sobre la superfície de l'agar.

-Agar Czapek modificat

Per al sembrat s'utilitza una nansa recta o agulla, s'impregna amb hisop i s'inocula l'agar fent una punció fins a tocar la base de la placa. Incubar per 24 hores a 28 ° C i examinar amb un microscopi per sobre i per sota de la placa per observar si s'han format les clamidosporas.

Temperatura i temps d'incubació

La temperatura i el temps d'incubació varien depenent de el tipus de microorganisme que es busca aïllar. En general les plaques s'incuben per una a dues setmanes en un rang de temperatura de 20 a 25 ° C.

No obstant això, hi ha condicions específiques per a alguns ceps. Per exemple, la majoria de les espècies de l'gènere Aspergillus té un creixement òptim a 30 ° C; però A. fumigatus creix a 50 ° C.

Pel que fa a el temps d'incubació una o dues setmanes és el normal, però Candida albicans pot desenvolupar-se en 24 a 48 hores a 25 ° C.

Característiques d'algunes colònies en aquest mitjà

-Penicillium atrovenetum

Es desenvolupa en 12 dies d'incubació a 27 ° C. Les seves colònies són petites (25 mm).

Les colònies tenen aspecte vellutat, amb vora definit color blanc i al centre presenta una tonalitat blava verdosa que conforme envelleix es torna gris. El revers de la colònia és ataronjat, col·locant a el mitjà de el mateix color per la producció de pigment.

-Aspergillus niger

Es desenvolupa amb un miceli de color blanc a groc i espores de color negre.

-Candida albicans

Es desenvolupen colònies cremoses de color beix clar. En l'agar Czapek modificat forma clamidosporas.

-Aspergillus parasiticus

Es desenvolupa un miceli de color verd fosc a 7 dies a 25 ° C.

Control de qualitat

Per avaluar la qualitat de l'medi de cultiu es poden sembrar ceps control certificades, com ara: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger desenvolupa un miceli de color blanc a groc i espores de color negre en 5 dies aproximadament, mentre que Candida albicans tindrà un creixement satisfactori en 24 hores d'incubació a 25 ° C; les colònies són color crema.

limitacions

Alguns estudis han revelat que per a la recuperació de actinomicets l'agar amb millor rendiment és l'agar papa dextrosa, quedant l'agar Czapek en segon lloc, però per a la recuperació d'Aspergillus i Penicillium l'agar Czapek és el que brinda la major taxa de recuperació.

referències

1. Dávila M, et al. Actinomicets antagònics contra fongs fitopatògens d'importància agrícola. Rev. Mex. Ciènc. Agric 2013, 4 (8): 1187-1196. Disponible a: scielo.org.
2. Lluna M, Lozada I, Blats À. Aïllament de soques d'Aspergillus niger, productores d'ocratoxina A, en cafè verd (Coffea aràbica) emmagatzemat. Rev. Mex. Mic. 2010; 32: 63-68. Disponible en.scielo.org.
3. Wikipedia contributors. Czapek medium. Viquipèdia The Free Encyclopedia. January 13, 2019, 20:30 UTC. Disponible a: en.wikipedia.org
4. Laboratoris Conda Pronadisa. Agar Czapek-Dox Modificat. Disponible a: condalab.com
5. Microkit Mitjans de Conreu. Czapek-Dox Agar. Diosponible a: medioscultivo.com