- Fonament de l'agar CLED
- Fonament de l'agar CLED (Bevis)
- usos
- Sembrat de mostres d'orina
- interpretació
- identificació
- preparació
- referències
El agar CLED (Cistina-Lactosa-Electrolitos-Deficient) és un mitjà de cultiu sòlid diferencial, utilitzat per al diagnòstic d'infeccions de les vies urinàries. La composició de el mitjà de cultiu està dissenyada per al bon creixement dels patògens urinaris i és ideal per a la quantificació de les unitats formadores de colònies (UFC).
El medi de cultiu CLED és no selectiu, ja que en ell poden créixer microorganismes Gram negatius i també Gram positius. Però això no és un problema, ja que la majoria de les infeccions urinàries són causades per un sol tipus de microorganisme.
agar CLED
En cas d'infeccions polimicrobianes es poden aconseguir 2 o 3 bacteris diferents, però és molt poc freqüent i la majoria de les vegades es tracta de mostres contaminades.
Entre els bacteris Gram negatives que poden créixer en aquest mitjà es troben els bacils pertanyents a la família Enterobacteriaceae i altres bacils entèrics, sent els uropatògens més freqüentment aïllats en mostres d'orina dels següents: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, entre d'altres.
Així mateix, entre els bacteris Gram positives que poden créixer en aquest mitjà estan Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp i fins i tot poden créixer llevats, com el complex Candida albicans.
No obstant això, a causa de la composició química de l'mitjà no permet el creixement d'alguns patògens genitourinaris exigents, com Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, entre d'altres.
Fonament de l'agar CLED
El medi de cultiu CLED posseeix com a font d'energia extracte de carn, hidrolitzat pancreàtic de caseïna i hidrolitzat de gelatina. Els mateixos proporcionen els nutrients per al desenvolupament de bacteris poc exigents.
També conté cistina, un aminoàcid que permet el creixement de coliformes, distingibles per la seva petita grandària.
Així mateix, conté com carbohidrat fermentable la lactosa, per aquest motiu aquest mitjà és diferencial; podent-se distingir els bacteris fermentadors de les no fermentadors de lactosa.
Els bacteris fermentadors fan virar el pH de l'mig per la producció d'àcids, desenvolupant colònies de color groc, mentre que els bacteris no fermentadoras no generen canvis en el medi, per tant prenen la coloració de l'agar original, color verd.
La reacció de fermentació és revelada gràcies a la presència de l'indicador de pH, que en aquest medi és el blau de bromotimol.
D'altra banda, la baixa concentració d'electròlits de l'mig inhibeix el típic creixement invasiu de l'gènere Proteus, denominat efecte swarming. Això genera un avantatge respecte a altres mitjans, ja que permet el comptatge de les UFC, incloent-hi si està present el gènere Proteus.
No obstant això, la baixa concentració d'electròlits inhibeix el creixement d'algunes espècies de l'gènere Shigella, sent aquesta un desavantatge respecte a altres mitjans.
Fonament de l'agar CLED (Bevis)
Hi ha una variant o modificació d'aquest mitjà realitzada per Bevis, qui va incorporar a la composició original fucsina àcida (indicador d'Andrade). El mateix actua en conjunt a el blau de bromotimol per diferenciar els bacteris fermentadors de les no fermentadoras.
La diferència entre el medi convencional i el modificat és el color que adopten les colònies. En el cas dels bacteris fermentadors de la lactosa, les colònies adquireixen un color taronja vermellós amb un halo rosa o vermell, en tant que les no fermentadoras són de color gris-blavós.
usos
L'agar CLED s'usa exclusivament per al sembrat de mostres d'orina. L'ús d'aquest mitjà és especialment freqüent en laboratoris europeus, mentre que a Amèrica és menys utilitzat.
La recol·lecció de la mostra ha de complir certs paràmetres per obtenir resultats fiables, entre ells:
- No estar prenent antibiòtics abans de la presa de mostra.
- Prendre preferiblement l'orina de la primera hora del matí, ja que és més concentrada, quan no sigui possible la presa de mostra per mètodes invasius.
- Rentar bé els genitals abans de prendre la mostra.
- Descarta el primer raig de micció i després col·locar l'envàs.
- Recol·lectar entre 25 a 30 ml de l'orina en envàs estèril bé retolat.
- Portar immediatament a laboratori envoltat en gel.
- Ha de ser processat abans de les 2 hores de emesa o refrigerar a 4 ° C per un màxim de 24 hores.
Sembrat de mostres d'orina
La mostra d'orina s'ha de diluir 01:50.
Per a la dilució col·loqui 0,5 ml d'orina de l'pacient i dilueixi amb 24,5 ml de solució fisiològica estèril.
Mesuri 0,1 ml de l'orina diluïda i sembri per superfície amb espàtula de drigalski sobre el medi CLED. Aquest és el mètode de sembrat indicat per explicar colònies. Per això s'utilitza en mostres d'orines, ja que els resultats s'han d'expressar en UFC / ml.
Per a la quantificació de les colònies obtingudes, procedeixi de la següent manera: expliqui les colònies de la placa i multipliqui per 10 i després per 50. Així obté la quantitat de UFC / ml d'orina.
interpretació
Comptatges per sobre de 100.000 UFC / ml --indica infecció urinària
Comptatges per sota de 1000 UFC / ml-- No hi ha infecció
Comptatges entre 1.000-10.000 UFC / ml --Dudoso, possible contaminació, repetir presa de mostra.
identificació
A les colònies crescudes en agar CLED se li han de fer un Gram i depenent de les característiques morfotintoriales de l'microorganisme es realitza un determinat subcultiu.
Per exemple, si és un bacil Gram negatiu es sembrarà sobre un agar MacConkey, on es corrobora la fermentació o no de la lactosa. A més, es s'annexa un agar nutritiu per a realitzar la prova de l'oxidasa.
En cas que el Gram reveli cocos Gram positius es pot subcultivar en agar manitol salat i en agar nutritiu. En aquest últim es realitza la prova de la catalasa. Finalment, si s'observen llevats es sembrarà sobre un agar Sabouraud.
Molts laboratoris obvien l'ús de l'mig CLED i prefereixen només utilitzar agar sang, MacConkey i agar nutritiu per sembrar les mostres d'orina.
preparació
En una fiola amb un litre d'aigua destil·lada dissolgui 36,2 gr d'agar CLED en pols. Després de 5 minuts de repòs, calenta l'agar resuspès, barrejant constantment fins a deixar bullir per 1 minut.
Després esterilitzar a 121 ° C per 15 minuts en l'autoclau. Culminat el temps, es retira de l'autoclau i es deixa refredar a la temperatura de 45 ° C. Posteriorment se serveix entre 15 - 20 ml en cada placa de Petri estèril.
El procediment de servit de les plaques s'ha de dur a terme dins en una campana de flux laminar o davant de l'encenedor de Bunsen per evitar la seva contaminació.
Les plaques servides es deixen solidificar, s'ordenen en un portaplaquero de forma invertida i es guarda a la nevera (2-8 ° C) fins al seu ús.
El pH final de l'mig preparat ha de quedar en 7,3 ± 0,2.
referències
- Recomanacions per al diagnòstic microbiològic de la infecció urinària. chil. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Disponible a: scielo.org.
- Panchi J. Identificació de l'agent microbià causant d'infeccions urinàries en pacients interns sotmesos a cateterisme vesical. 2016. Treball de Grau per optar a l'títol de Llicenciada en Laboratori Clínic. Universitat Tècnica d'Ambato. Equador.
- Laboratoris Britània. Medi CLED. Disponible a: britanialab.com.
- Laboratoris Renylab. Instruccions d'ús, Agar CLED. 2013 Disponible a: es.renylab.ind.br.
- Laboratoris Cultimed. Manual bàsic de Microbiologia. Disponible a: ictsl.net.
- Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. The CLED agar option in Urine culture routine. A prospective and comparative evaluation. Diagn microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
- García P, Parets F, Fernández de el Barri M. (1994). Microbiologia clínica pràctica. Universitat de Cadiz, 2a edició. Servei de Publicacions UCA.