AGAR XOCOLATA: FONAMENT, USOS I PREPARACIÓ - BIOLOGIA - 2025

L' agar xocolata és un mitjà de cultiu sòlid, enriquit, no selectiu i no diferencial. És utilitzat principalment per a l'aïllament de microorganismes exigents des del punt de vista nutricional, encara que en ell poden créixer qualsevol tipus de bacteris.

És per això que la seva utilitat augmenta especialment en el sembrat de mostres que normalment són estèrils, com LCR i líquid articular. Encara que també s'inclou dins dels mitjans escollits per sembres de mostres polimicrobianes, però en aquests casos cal l'addició d'antibiòtics que inhibeixin la flora concomitant.

Agar Xocolata amb creixement bacterià

Aquest mitjà té un color marró característic molt semblant a la xocolata, d'allí el seu nom. La preparació és molt similar a la de l'agar sang, només que en aquest cas la sang ha de ser escalfada amb la finalitat que els glòbuls vermells es trenquin.

La seva preparació, a l'igual que l'agar sang, és molt delicada, ja que és fàcilment contaminable. Per això molts laboratoris prefereixen adquirir aquest mitjà ja preparat per cases comercials que garanteixen la seva qualitat.

fonament

Aquest mitjà està compost per una base d'agar ric en nutrients i sang escalfada. La hemòlisi dels glòbuls vermells proporcionen a l'mig factor X (hemina) i factor V (NAD), necessaris per al creixement d'alguns microorganismes, com el gènere Haemophilus. També és molt útil per a l'aïllament de neissèria sp.

A l'igual que l'agar sang, es pot fer servir com agar base diferents mitjans depenent de la necessitat. Entre els mitjans utilitzats es troben infusió cervell cor i agar soja tripticasa, encara que els més recomanats són agar Columbia, Müeller Hinton, agar GC i agar Thayer Martin.

Algunes variants d'agar xocolata inclouen un suplement enriquit disponible comercialment anomenat Isovitalex o Polivitex.

Aquests suplements contenen vitamina B ₁₂, L-glutamina, adenina, clorhidrat de guanina, àcid p-aminobenzoic, nicotinamida adenina dinucleòtid (NAD), pirofosfat de tiamina, nitrat fèrric, clorhidrat de tiamina, hidroclorur de cisteïna, L-cistina i glucosa.

És important ressaltar que l'agar xocolata és més enriquit que l'agar sang, però no permet l'observació dels patrons d'hemòlisi.

usos

Font: pixnio.com. Autor:

Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Agar xocolata preparat amb agar Columbia

Aquest mitjà conté digerit pancreàtic de caseïna i de cor, digerit pèptic de carn, clorur de sodi, agar, extracte de llevat i midó de blat de moro. A més és ric en vitamines, minerals i aminoàcids essencials.

Aquesta base amb sang escalfada és ideal per a l'aïllament de bacteris de l'gènere Neisseria. D'altra banda, si a el medi addicionalment se li afegeix un suplement per Brucella es pot aïllar l'esmentat microorganisme. Es milloren els resultats usant sang de cavall.

Agar xocolata preparat amb agar base GC (per gonococs)

Aquest mitjà conté peptones, midó de blat de moro, buffers monobásicos i dibàsics, clorur de sodi i agar.

La majoria de les presentacions d'agar xocolata preparats comercialment vénen amb aquesta base i no contenen sang escalfada, sinó una barreja sintètica de hemina i un suplement químic de factors de creixement, vitamines, minerals, aminoàcids, factor V i glucosa.

Agar xocolata preparat amb agar Müeller Hinton

S'usa per a realitzar la prova de susceptibilitat antimicrobiana de microorganismes exigents, com Streptococcus pneumoniae usant 5% de sang de moltó escalfada.

També serveix per a l'aïllament primari de neissèria i Haemophilus, però en el cas particular de l'aïllament d'Haemophilus es prefereix l'ús de sang de cavall, per ser una font rica en factor X i V.

D'altra banda, si la mostra a sembrar prové d'una àrea no estèril és recomanable l'addició d'antibiòtics per inhibir la flora normal de l'àrea.

Exemple per a mostres respiratòries on se sospiti la presència de bacteris de l'gènere Haemophilus s'usa bacitracina per inhibir el creixement de Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus i neissèria saprófitas.

En el cas de mostres de xancres genitals, on se sospita d'Haemophilus ducreyi, s'ha fet servir amb èxit un agar xocolata preparat de la següent manera: agar Müeller - Hinton amb 5% de sang chocolatizada de cavall, 1% d'enriquiment Isovitalex i 3 mg / ml d'vancomicina.

Agar xocolata preparat amb agar Thayer Martin

Aquest mitjà és especial per a l'aïllament de Neisseria gonorrhoeae. El mateix ha de contenir antibiòtics per inhibir la flora acompanyant. S'usa sang de be.

preparació

S'han de veure les indicacions de preparació de l'agar base que es va a utilitzar. Les mateixes es troben a el revers de l'envàs de l'mig deshidratat. Generalment descriuen quant es ha de pesar per preparar un litre de medi de cultiu.

Al laboratori es pot preparar la quantitat exacta necessària, pot ser més o menys d'un litre.

càlculs

Es realitza una regla de tres per calcular quant s'ha de pesar per preparar el volum que es desitja. exemple:

Si per a 1 litre es necessita tot 40 gr i el laboratori requereix 800 ml, es diu:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml ------------ X

La fórmula quedarà de la següent manera:

X = 32 gr (quantitat tot per 800 ml).

Pesar i dissoldre

Es procedeix a pesar la quantitat necessària i es col·loca en una fiola amb l'aigua.

S'escalfa a foc moderat i es va barrejant suaument amb moviments rotatoris fins dissoldre completament el medi deshidratat, deixant bullir per 1 minut.

esterilitzar

S'introdueix la fiola a l'autoclau per esterilitzar el medi a 121 ° C per 20 minuts.

Agregat de la sang

A l'sortir de l'autoclau es deixa reposar fins que la temperatura de l'mig estigui aproximadament entre 56 a 70ºC per posar la sang i barrejar fins que el medi es torni color marró.

Si es va a afegir suplements, aquest és el moment de fer-ho. Posteriorment barrejar i servir 20 ml a cada placa de Petri estèril.

Tot el procediment s'ha de realitzar en una campana de flux laminar o al voltant de l'encenedor de Bunsen.

Deixar reposar fins que es solidifiquin i guardar de manera invertida en nevera.

Una altra forma de preparar agar xocolata sense usar sang

Es prepara el medi base com es va descriure anteriorment, es dissol l'hemoglobina deshidratat obtinguda comercialment i s'esterilitza a l'autoclau.

Ambdues solucions es deixen refredar a 50 ° C, s'uneixen i s'agrega el suplement. Barrejar en condicions asèptiques i després servir en plaques de Petri estèrils.

Control de qualitat

És important que la sang es col·loqui a la temperatura indicada, ja que és la ideal per lisar els glòbuls vermells i alhora mantenir el factor V que és termosensible.

No han de quedar bombolles sobre la superfície de l'agar. De cada lot de 100 plaques s'ha de covar una o dues plaques a l'estufa a 37 ° C durant 24 hores per comprovar la seva esterilitat.

Per a millors resultats, l'agar xocolata ha de ser usat a l'poc temps de la seva preparació.

S'han de tenir en el laboratori soques bacterianes controls per avaluar l'eficàcia de l'mig acabat de preparar per al creixement dels principals microorganismes exigents d'importància clínica.

referències

1. García P, Parets F, Fernández de el Barri M. (1994). Microbiologia clínica pràctica. Universitat de Cadiz, 2a edició. Servei de Publicacions UCA.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnòstic Microbiològic de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
3. Köneman I, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnòstic Microbiològic. (5ta ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
4. Llanes R, Reis A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Factibilitat de l'ús de l'medi de cultiu base d'Agar GC-Biocen al Laboratori de Microbiologia. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Disponible a: scielo.sld.
5. Wikipedia contributors. Xocolata agar. Viquipèdia The Free Encyclopedia. December 17, 2018, 19:54 UTC. Disponible a: en.wikipedia.org.