El agar cetrimida o cetrimide és un mitjà de cultiu sòlid selectiu, dissenyat per a l'aïllament de Pseudomonas aeruginosa. Està basat en posar en evidència la producció de pigments característics d'aquesta espècie i ser elaborat a partir de la modificació de l'agar Tech, creat per King, Ward i Raney.
La fórmula original contenia sals de clorur de magnesi, sulfat de potassi, digestió pancreàtica de gelatina i agar-agar. La modificació de la fórmula va consistir en l'agregat de cetrimida (bromur de cetil trimetil amoni) i glicerol.
Agar cetrimida sembrat amb Pseudomonas aeruginosa Font: BiotechMichael, from Wikimedia Commons
L'agar cetrimida és útil per a l'estudi microbiològic de mostres en on se sospiti la presència de Pseudomonas aeruginosa. Cal destacar que aquest bacteri és de summa importància, ja que encara forma part de la microbiota normal ambiental, sovint es comporta com un patogen oportunista.
Per això, un dels problemes més comuns originats per aquest germen són les infeccions nosocomials, és a dir, aquelles que es produeixen dins de l'ambient hospitalari, atacant als pacients que tenen un sistema immunològic deprimit.
D'altra banda, a causa de l'afinitat que té aquest microorganisme amb la humitat, els blancs de contaminació més vulnerables són: equips de respiració assistida, medicaments, nebulitzadors, fonts d'aigua, aires condicionats, desinfectants, solucions sabonoses, solucions injectables, ferides obertes, catèters, sondes urinàries, entre d'altres.
En aquest sentit, l'agar cetrimida és útil per realitzar controls microbiològics i cultius als elements anteriorment esmentats.
fonament
L'agar cetrimida es fonamenta en la capacitat que té el mitjà per afavorir el creixement de P. aeruginosa, estimular la producció dels seus pigments i al seu torn inhibir el creixement d'altres microorganismes.
Aquestes propietats es deuen a la funció que compleixen cadascun dels seus components. La peptona de gelatina present serveix com a font de nitrogen, vitamines i minerals. El glicerol o glicerina funciona com a font de carboni.
Per la seva banda, la cetrimida (bromur de cetil trimetil amoni) és la substància que inhibeix el creixement d'altres bacteris diferents a P. aeruginosa, incloent altres espècies pertanyents a el mateix gènere.
La inhibició es produeix perquè la cetramida actua com un detergent catiònic, aconseguint desestabilitzar la membrana plasmàtica de la majoria dels bacteris, llevat de P. aeruginosa i algunes altres que aconsegueixen sobreviure.
D'altra banda, conté clorur de magnesi i sulfat de potassi. Aquests compostos estimulen l'expressió fenotípica relacionada amb la capacitat de Pseudomonas aeruginosa de produir diversos pigments, entre ells: piocianina, pioverdina, piorrubina, piomelanina i fluoresceïna. Finalment, conté agar-agar, que li dóna la consistència sòlida.
interpretació
La interpretació de l'creixement obtingut en aquest agar es realitza de la següent manera:
L'observació de colònies rodones, llises, de vores regulars, amb producció de pigments blau-verdós, verd, marró o vermellós, més l'emissió d'olor fruiter (aminoacetofenona), és un resultat presumptiu de la presència d'aquest bacteri en aquesta mostra.
D'altra banda, és indicatiu de P. aeruginosa l'observació d'un pigment groc-verdós brillant sobre les colònies quan la placa és exposada a llum ultraviolada.
Fluorescència de les colònies de P. aeruginosa en agar cetrimida sota la llum ultraviolada.
Cal destacar que cada color observat es deu a la producció d'un pigment específic. El pigment blau-verdós correspon a la producció de piocianina, el verd a pioverdina, el vermellós a piorrubina, el marró a piomelanina i la fluorescència groc- verdosa brillant sota de la llum ultraviolada a fluoresceïna.
preparació
Pesar 43 g de medi deshidratat i dissoldre en aigua destil·lada. Afegir 10 ml de glicerol. Porteu la barreja a una font de calor. Deixi bullir per uns minuts fins a la dissolució completa.
Autoclau a 121 ° C per 15 minuts. Deixeu reposar i serveixi en plaques de Petri estèrils quan la temperatura estigui en 50 ° C aproximadament.
Deixar solidificar, invertir, ordenar en plaqueros i guardar a la nevera fins al seu ús. Per sembrar les plaques d'agar cetrimida s'han de treure de la nevera amb antelació i deixar que prengui temperatura ambient.
El pH final de l'mig ha de quedar en 7,2 ± 0,2.
El color de l'mig deshidratat és beix i el preparat és blanc opac.
usos
En l'agar cetrimida es poden sembrar tot tipus de mostres en què se sospiti la presència de Pseudomonas aeruginosa. Per tant, és útil en totes les àrees de la microbiologia (ambiental, industrial, clínica, d'aigua i aliments).
És de gran importància per analitzar ambients hospitalaris i així poder aplicar les intervingudes correctives, ja que aquest microorganisme arriba als pacients a través d'equips, medicaments, solucions i insumos contaminats que són utilitzats pel pacient.
D'aquesta manera, el microorganisme pot infectar el tracte respiratori inferior, tracte urinari i ferides de pacients inmunosuprimidos.
També es poden fer recomptes de colònies de P. aeruginosa en proves de límit microbià.
sembrat
L'agar cetrimida pot utilitzar-se com cultiu primari. La placa s'inocula en un dels seus vores i d'allí es distribueix per esgotament a la resta de la placa. Les mostres líquides es poden sembrar per superfície amb espàtula de drigalski.
Les plaques s'incuben en aerobiosi a 37 ° C per 24 hores d'incubació.
limitacions
-Un petit percentatge de soques de Pseudomonas aeruginosas no produeixen piocianina, de manera que es pot interpretar un fals negatiu.
-Algunes espècies de Pseudomonas d'importància clínica són inhibides en aquest mitjà.
-Tot i observar les característiques descrites per Pseudomonas aeruginosa, s'han de corroborar amb proves addicionals d'identificació. Un assaig que no ha de faltar és la prova de oxidasa, la mateixa ha de donar positiva.
-Algunes enterobacteris poden créixer en aquest medi i desenvolupar un pigment groc, però es diferencia de Pseudomonas aeruginosa en què a l'sotmetre la placa a llum ultraviolada no hi ha fluorescència.
- Serratia marcescens aconsegueix desenvolupar-se i produeix un pigment rosat.
-Si les plaques sembrades d'agar cetrimide són exposades per un temps a temperatura ambient, els ceps de P. aeruginosa poden perdre la fluorescència observada sota de la llum ultraviolada, però la propietat és recuperada si es torna a incubar a 37 ° C.
Control de qualitat
Per analitzar el bon funcionament de l'agar cetrimida es poden usar ceps controls, com ara: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Els resultats esperats són:
- Per P. aeruginosa bon creixement, amb pigment blau-verdós i fluoresceïna positiva.
- S. maltophilia i S. aureus seran inhibides de manera parcial a completa.
- S'espera que Escherichia coli sigui inhibida completament.
referències
- Callicó A, Cedre B, Sifontes S, Torres V, Pi I, Callís A, Esnard S. Caracterització fenotípica i serològica d'aïllaments clínics de Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Laboratoris Conda Pronadisa. Base d'agar cetrimida. 2014. Disponible a: condalab.com
- Laboratoris Britània. Cetrimida agar. 2015. Disponible a: britanialab.com
- Laboratoris BD. BD Pseudosel agar (Cetrimide agar). 2013. Disponible a: bd.com
- Laboratori Francisco Soria Melguizo, CA Cetrimide agar. 2009. Disponible a: