L' agar Biggy és un mitjà de cultiu sòlid, selectiu i diferencial. Va ser dissenyat per aïllar i ajudar en la identificació de les principals espècies de Candida. El seu nom Biggy prové de les sigles en anglès Bismuth Glucose Glycine Yeast.
La fórmula original va ser creada per Nickerson, per això aquest mitjà també és conegut com agar Nickerson. Actualment està composta per extracte de llevat, glicina, dextrosa, citrat d'amoni, citrat de bismut, sulfit de sodi i agar.
Representació gràfica de l'agar Biggy. Font: Flickr.com
L'agar Biggy està formulat per a la diferenciació de les espècies Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei i C. kefyr, però també creixen altres espècies com Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum i Saccharomyces cerevisiae.
Posseeix bona sensibilitat i especificitat, però, a l'comparar-lo amb altres mitjans amb funció similar, aquest queda en segon lloc, sent superat pel CHROMagar. És per això que molts laboratoris prefereixen aquest últim, encara que és molt més costós.
Ha de quedar clar que l'ús de l'agar Biggy, així com d'altres mitjans similars, ajuden a una identificació presumptiva ràpida, però mai confirmatòria. Per això, s'ha de comptar amb mètodes d'identificació addicionals; per exemple, sistemes d'identificació Vitek 32 i API 20.
fonament
L'agar Biggy és considerat un mitjà parcialment selectiu per a l'aïllament de llevats, especialment de l'gènere Candida, encara que poden créixer altres gèneres.
També és un mitjà diferencial perquè depenent de l'espècie involucrada s'han d'observar característiques diferents quant aspecte, color, forma i mida. És considerat un mitjà cromogènic, pel desenvolupament de colors diversos en les colònies.
El color que presenten les colònies dels llevats es deu a la presència de sulfit de bismut en l'agar. Nickerson es va adonar que els llevats de l'gènere Candida realitzen una reducció extracel·lular de l'sulfit de bismut, transformant-lo en sulfur de bismut (substància insoluble de color negre). Això origina colònies entre marró clar a negre.
Aquest agar conté extracte de llevat i dextrosa, el que proporciona la font de nutrients bàsics i energia per al desenvolupament dels llevats. La glicina és un estimulant de l'creixement dels llevats, mentre que inhibeix el desenvolupament de certs bacteris.
En aquest mateix sentit, el citrat d'amoni i bismut, així com el sulfit de sodi actuen com a inhibidors de el creixement bacterià. L'agar és l'agent que li brinda la consistència sòlida a l'mig.
preparació
Pesar 45 g de el mitjà de cultiu deshidratat i dissoldre en un litre d'aigua destil·lada. Agitar i escalfar la mescla, deixant bullir per 1 minut fins a la dissolució completa. Aquest mitjà de cultiu no s'esterilitza en autoclau.
A l'refredar aproximadament a 45 ° C en bany de maria abocar 20 ml sobre plaques de Petri estèrils.
El color de l'mig deshidratat és gris groguenc i preparat és un gel color blanc groguenc, en el qual pot observar-se un lleu precipitat floculant.
El pH ha de quedar a 6,8 ± 0,2.
El medi preparat s'ha de guardar en nevera (4 ° C) i protegir-se de la llum. Com és un mitjà que no autoclava s'ha d'utilitzar el més aviat possible. Es recomana el seu ús abans que compleixi 3 dies des de la preparació.
ús
Les plaques s'incuben a temperatura ambient (25 ° C) per 24, 48 i 72 hores, podent allargar el temps d'incubació fins a 5 dies.
Cada espècie de Candida desenvolupa certes característiques que les fa distingir una de l'altra. Els fabricants de medi descriuen les següents característiques per a cada espècie:
-Complex Candida albicans: es desenvolupa en aquest agar com colònies llises, rodones, color cafè o negres, amb un lleuger vora micelial. Amb l'excepció que el color fosc no es difon a el medi.
-Candida tropicalis: les colònies brillants, petites, de color cafè fosc, amb centre negre i lleuger vora micelial. El color fosc es difon cap al medi, característica que és pròpia d'aquesta espècie, després d'haver estat covada durant 72 hores.
-Candida krusei desenvolupa colònies d'aspecte rugós, planes, de grans dimensions, amb la vora entre color cafè a negrós.
-Candida parakrusei: colònies grandària mitjana, la majoria de les vegades amb aspecte rugós, planes. El color pot variar entre cafè vermellós fosc brillant a cafè vermellós clar. La vora de les colònies presenta un miceli extens, groguenc.
-Candida stellatoidea: desenvolupa colònies mitjanes, planes, color cafè fosc, gairebé negre. El desenvolupament micelial és molt escàs.
Un estudi realitzat per Yücesoy i Marol el 2003, va demostrar que el medi CHROMagar presenta millor sensibilitat i especificitat per a la diferenciació i identificació de diferents espècies de Candida que l'agar Biggy.
Control de qualitat
Per al control d'esterilitat s'incuben plaques sense inocular a 25 ° C, en foscor per 24 a 48 hores, s'espera que no hi hagi creixement de cap tipus, ni canvi de color.
Els ceps ATCC recomanades per realitzar el control de qualitat de l'mitjà són:
Complex Candida albicans ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. En totes elles s'espera el creixement tal com es va descriure anteriorment.
També es poden fer servir aquestes soques:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 i Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. En les dues primeres s'espera la inhibició total, però en cas de créixer parcialment les colònies seran color crema.
En el cas de S. aureus s'espera que sigui inhibida totalment, però si creixen de forma parcial les seves colònies són blanques.
limitacions
Alguns bacteris són capaços de desenvolupar-se en aquest mitjà i fins i tot poden tornar-se de color fosc, simulant una colònia de Candida, però a el fer un estès de la colònia i observar-lo a l'microscopi és fàcilment descartable.
Taula: Característiques de les colònies d'alguns llevats en agar Biggy segons el treball de Yücesoy M i Marol S.
Font: Yücesoy M, Marol S. Performance of CHROMAGAR candidats and Biggy agar for identification of yeast species. Ann Clin microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7
referències
- Yücesoy M, Marol S. Performance of CHROMAGAR candidats and Biggy agar for identification of yeast species. Ann Clin microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Fitxa Tècnica Agar Biggy. Disponible a: mcdlab.net/
- Lab Neogen. Biggy Agar. Disponible a: foodsafety.neogen.com
- Laboratoris Conda Pronadisa. Agar Biggy. Disponible a: condalab.com
- Laboratoris BD. BD Biggy Agar (Bismuth Glucose Glycine Yeast Agar). 2011. Disponible a: bd.com