- fonament
- preparació
- falques
- plaques
- Preparació d'agar sang
- usos
- Ús sense suplements
- Com agar base per a la preparació d'altres mitjans
- enriquits
- selectiu
- Control de qualitat
- referències
El agar BHI o agar Brain Heart Infusió és un mitjà de cultiu sòlid nutritiu. En espanyol ens referim a ell com agar infusió cervell cor. És un mitjà de cultiu no selectiu, el que vol dir que poden desenvolupar-se tot tipus de bacteris Gram positives i Gram negatives, així com alguns fongs levaduriformes i filamentosos.
Està compost per infusió de cervell i cor de vedella, hidrolitzat pèptic de teixits animals, hidrolitzat pancreàtic de caseïna, clorur sòdic, glucosa, fosfat disòdic i agar.
Plaques de BHI. Font: Fotografia presa per l'autora MSc. Marielsa Gil.
Cal destacar que l'agar BHI és un dels mitjans de cultiu d'ús més freqüents en els laboratoris de bacteriologia. Es pot utilitzar sense suplements com a cultiu primari, subcultiu de colònies obtingudes en altres mitjans selectius o per al manteniment de soques al laboratori.
D'altra banda, és un mitjà ideal per ser utilitzat com a base en la preparació de mitjans enriquits, com l'agar sang i l'agar xocolata. Tots dos ideals per aïllar microorganismes exigents des del punt de vista nutricional. No obstant això, cal tenir en compte que com conté glucosa no és adequat per observar els patrons d'hemòlisi.
Així mateix, l'agar BHI pot ser utilitzat per a la preparació de mitjans especials per a l'aïllament de microorganismes patògens de difícil creixement en els mitjans comuns, entre ells: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae i Histoplasma capsulatum.
Amb l'additiu d'antibiòtics l'agar BHI es converteix en un medi selectiu per a l'aïllament de fongs.
fonament
És un mitjà de cultiu nutritiu per aïllar microorganismes moderadament exigents, podent-se augmentar el seu enriquiment amb l'addició de sang i altres suplements nutritius.
És un mitjà de cultiu no selectiu, per tant permet el creixement de la majoria dels bacteris Gram positives i Gram negatives, així com també d'alguns fongs. No obstant això, es pot convertir en selectiu amb l'addició d'antibiòtics.
El medi conté infusió de cervell i cor de vedella, hidrolitzat pèptic de teixits animals i hidrolitzat pancreàtic de caseïna; tots aquests compostos actuen com a fonts de vitamines, aminoàcids, nitrogen i carboni.
La glucosa és un carbohidrat que proporciona energia als microorganismes una vegada que aquests ho han fermentat. Com a, el clorur sòdic i el fosfat disòdic mantenen l'equilibri osmòtic i proporcionen un pH proper a la neutralitat. Finalment, l'agar dóna la consistència sòlida a l'mig.
preparació
Pesar 52 grams de el medi deshidratat i dissoldre en un litre d'aigua destil·lada. Portar la barreja a una font de calor fins bullir, agitant freqüentment durant el procés de dissolució.
Es poden preparar falques o plaques d'agar BHI sense additius.
falques
Per a la preparació de falques servir la preparació fins omplir la meitat de cada tub, tapar i esterilitzar en autoclau a 121 ° C per 15 minuts, a l'sortir ficar al llit sobre una base fins que solidifiquen. Posteriorment guardar a la nevera fins al seu ús.
Falques de BHI per bacterioteca. Font: Fotografia presa per l'autora MSc. Marielsa Gil.
plaques
La barreja dissolta es autoclava a 121 ° C per 15 minuts, a l'sortir es deixa refredar fins a 50 ° C i es serveixen 20 ml d'el medi en plaques de Petri estèrils. Es deixen solidificar, s'inverteixen i es guarden a la nevera fins al seu ús. Deixar que les plaques prenguin temperatura ambient abans de sembrar.
El pH de l'mig ha de quedar en 7,4 ± 0,2.
El mitjà sense preparar és de color beix i preparat és de color ambre clar.
Preparació d'agar sang
Després d'esterilitzar el medi, refredar fins a una temperatura aproximada de 45 a 50 ° C, en aquest moment afegir la sang (50 ml), barrejar suaument per homogeneïtzar i servir asèpticament 20 ml en cada placa de Petri. Si es formen bombolles sobre la placa s'ha de passar ràpidament la flama de l'encenedor sobre les bombolles per eliminar-les.
Així mateix, es poden preparar els mitjans especials agregant els additius corresponents quan la barreja arribi a la temperatura de 45 a 50 ° C.
El mitjà queda de color vermell cirera.
usos
Ús sense suplements
L'agar BHI sense additius és útil com a cultiu primari i per sembrar ceps pures de microorganismes poc o mitjanament exigents per a la posterior identificació.
Com és un mitjà de color clar, és ideal per a l'observació de pigments ia més a ell no contenir substàncies interferents es poden realitzar sobre ell algunes proves bioquímiques, com l'oxidasa i la catalasa, o muntar altres proves bioquímiques a partir de colònies provinents d'aquest agar.
Així mateix, les falques d'agar BHI són molt utilitzades per al manteniment de soques per un temps determinat al laboratori (bacterioteca).
Les plaques o falques sembrades per superfície amb soques bacterianes s'incuben a 37 ° C per 24 a 48 hores. En tant que, en fongs la temperatura i el temps d'incubació dependrà de l'tipus de fong que es busca.
Com agar base per a la preparació d'altres mitjans
Amb aquesta base es poden preparar mitjans enriquits i selectius.
enriquits
La seva principal funció és servir com a base en la preparació de l'agar sang d'ús de rutina en els laboratoris de microbiologia. Especialment, la base de BHI és propícia per a l'aïllament de soques de Streptococcus sp. No obstant això, té l'inconvenient de no ser adequat per a l'observació dels patrons d'hemòlisi per contenir glucosa.
També s'usa en la preparació de l'agar sang de conill o de cavall per a l'aïllament d'Haemophilus sp. Per a millors resultats es pot addicionar un suplement d'enriquiment (IsoVitaleX).
Si les mostres provenen de l'tracte respiratori a l'agar se li pot afegir bacitracina per inhibir la flora acompanyant i augmentar la probabilitat de recuperació dels ceps d'Haemophilus sp.
D'altra banda, es pot preparar agar sang (be o humana) amb cistina telurito per aïllar Corynebacterium diphtheriae. Així mateix, és útil per a preparar agar sang de conill, amb l'agregat de cistina i glucosa per a l'aïllament de Francisella tularensis.
El sembrat de les plaques d'agar sang es realitza per esgotament i s'incuba a 35-37 ° C per 24-48 hores a microaerofilia (5-10% de CO 2).
selectiu
Aquest mitjà amb l'agregat d'antibiòtics pot substituir l'agar Sabouraud per a l'aïllament de fongs.
El combinat d'agar BHI amb cloramfenicol - gentamicina o penicil·lina -, estreptomicina i sang de cavall és ideal per a l'aïllament de Histoplasma capsulatum.
Depenent de l'microorganisme que es busca aïllar es recomana la incubació a 35-37 ° C oa temperatura ambient en aerobiosi. De vegades és necessari la incubació en ambdós rangs de temperatura, utilitzant 2 plaques per a això.
Alguns fongs com Trichophyton mentagrophytes s'han d'incubar a temperatura ambient fins per 7 dies.
Control de qualitat
De cada lot preparat es recomana incubar 1 placa o falca a 37 ° C per 24 hores i verificar que no hi hagi creixement; especialment és important quan es prepara agar sang, pel fet que és un mitjà fàcilment contaminable.
D'altra banda, es pot avaluar la qualitat de l'mig inoculant ceps patrons conegudes o certificades i observar el seu desenvolupament.
En aquest sentit, per avaluar l'agar BHI sense additius es poden usar soques d'Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 o Candida albicans ATCC 10231. Es s'incuba a 37 ° C a aerobiosi per 24 a 48 hores. En tots els casos s'espera un creixement satisfactori.
Per avaluar les plaques d'agar sang es poden sembrar ceps de Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 o Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.
Les soques bacterianes s'incuben a 37 ° C a microaerofilia per 24 hores, mentre que el fong s'incuba a temperatura ambient en cambra humida fins per 7 dies. En tots els casos s'espera creixement satisfactori.
referències
- Laboratoris Britània. Cervell Cor infusió Agar. 2015. Disponible a: britanialab.com.
- Laboratoris BD. Brain Heart Infusion (BHI) Agar. 2013. Disponible a: bd.com.
- Laboratoris Difco Francisco Soria Melguizo, SA Brain Heart Infusion Agar. 2009.
- Laboratori Neogen. Brain Heart Infusion Agar. Disponible a: foodsafety.neogen.com
- Gil M. Agar sang: fonament, usos i preparació. 2018. Disponible a: lifeder.com.
- Wikipedia contributors. Brain heart infusion. Viquipèdia The Free Encyclopedia. September 19, 2018, 03:58 UTC. Disponible a: wikipedia.org. Accessed March 2, 2019.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnòstic Microbiològic de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.