AGAR BAIRD PARKER: FONAMENT, PREPARACIÓ I ÚS - BIOLOGIA - 2024

El agar Baird Parker és un mitjà de cultiu sòlid, selectiu i diferencial. Va ser creat el 1962 per a la detecció i recompte d'estafilococs coagulasa positius (Staphylococcus aureus).

Està compost per hidrolitzat pancreàtic de caseïna, extracte de carn, extracte de llevat, clorur de liti, glicina, piruvat sòdic, telurito potàssic, agar i emulsió de rovell d'ou.

Colònies típiques de Staphylococcus aureus en agar Baird Parker. Font: Daizy John

L'agar Baird Parker es basa en la capacitat que té el S. aureus de reduir el telurito i produir lecitinasa. Les dues propietats generen una colònia amb característiques específiques per a aquesta espècie. Per tant, ofereix una gran efectivitat en la detecció d'aquest microorganisme.

Les colònies típiques de S. aureus són negres o grises fosques, amb vora incolor i un halo clar que les envolta, diferenciant-se de la resta de microorganismes. Aquest patogen es pot trobar en mostres clíniques, aigües, cosmètics i aliments crus o cuits.

El seu diagnòstic o detecció és de summa importància, a causa de la varietat de patologies que produeix, com intoxicació alimentària, la síndrome de la pell escaldada, síndrome de l'xoc tòxic, abscessos, meningitis, septicèmia, endocarditis, entre d'altres.

fonament

poder nutritiu

El hidrolitzat pancreàtic de caseïna, l'extracte de carn i l'extracte de llevat són les fonts de nutrients, vitamines i minerals necessaris per al desenvolupament general microbià, mentre que el piruvat i la glicina són compostos que afavoreixen el creixement específic de Staphylococcus aureus.

selectiu

L'agar Baird Parker és selectiu perquè conté substàncies que inhibeixen el creixement de la flora acompanyant, mentre que afavoreix el desenvolupament de S. aureus. Els compostos inhibidors són el clorur de liti i el telurito de potassi.

diferencial

Aquest mitjà permet diferenciar el S. aureus de la resta dels Estafilococs coagulasa negatius. S. aureus té la capacitat de reduir el telurito a tel·lur lliure metàl·lic negre, formant colònies negres o grises fosques.

Així mateix, el rovell d'ou proporciona els substrats per evidenciar la presència de l'enzim lecitinasa i lipasa. S. aureus és lecitinasa positiva i per tant s'observarà un halo clar al voltant de la colònia, indicant que la lecitina va ser hidrolitzada.

En aquest sentit, l'aparició en aquest agar de colònies negres o grises fosques brillants amb halo clar voltant indiquen presència de S. aureus.

Si es forma una zona de precipitació és indicatiu que hi ha activitat de la lipasa. Algunes soques de S. aureus són lipasa positives i altres negatives.

En el cas que el S. aureus sigui lipasa positiva s'observarà una zona opaca al voltant de la colònia negra o gris fosca, i després l'halo clar per l'acció de la lecitinasa.

Les colònies de bacteris diferents de S. aureus capaços de créixer en aquest mitjà desenvoluparan colònies incolores o de color marró, sense halo al voltant.

També es poden observar colònies atípiques color negre amb o sense vora incolor, però sense halo clar. Aquestes colònies no s'han de prendre en compte, no corresponen a S. aureus.

preparació

Emulsió de rovell d'ou

Es pren un ou fresc de gallina, es renta bé i es col·loca 2 a 3 hores en alcohol a l'70%. Després, l'ou s'obre asèpticament i se separa acuradament la clara del rovell. Posteriorment es prenen 50 ml del rovell i es barregen amb 50 ml de solució fisiològica estèril.

Telurito de potassi a l'1% p / v

Algunes cases comercials venen el telurito de potassi a l'1% a punt per utilitzar. S'agrega a l'mig abans que el medi solidifiqui.

Per preparar aquesta solució al laboratori es pesa 1.0 g de telurito de potassi i es dissol en una part d'aigua. Posteriorment es completa la quantitat d'aigua fins arribar a 100 ml. La solució ha de esterilitzar pel mètode de filtració.

Preparació de l'medi de cultiu

Malgrat 60 gr de el medi deshidratat i dissolgui en 940 ml d'aigua destil·lada. Deixi la barreja en repòs durant 5 a 10 minuts aproximadament.

Apliqui calor remenant el medi freqüentment per millorar el procés de dissolució. Deixi bullir per un minut. Esterilitzi en l'autoclau a 121 ° C per 15 minuts.

Deixeu reposar fins que arribi a una temperatura de 45 ° C i afegiu 50 ml de l'emulsió de rovell d'ou i 10 ml d'telurito a l'1%. Barregi bé i serveixi entre 15 a 20 ml sobre plaques de Petri estèrils.

Deixar solidificar, ordenar de manera invertida en plaqueros i guardar a la nevera fins al seu ús.

El pH final de l'mig preparat ha de quedar en 6,8 ± 0,2.

Abans de sembrar una mostra, s'ha d'esperar al fet que la placa prengui la temperatura de l'ambient. Sembri les plaques per estriació o per sembrat en superfície amb espàtula de Drigalski.

El color de l'mig deshidratat és torrat clar i el color de l'medi preparat és ambre clar.

ús

mostres clíniques

Les mostres clíniques es sembren de manera directa descarregant part de l'material en un extrem de la placa, ia partir d'allí s'estria per esgotament. Incubar per 24 a 48 hores a 35-37 ° C.

Mostres d'aliment

Pesar 10 g de la mostra d'aliment i homogeneïtzar en 90 ml d'aigua peptonada a l'0,1%, a partir d'allí es preparen dilucions si cal. Inocular les plaques per triplicat amb 0,3 ml de les solucions preparades, i sembrar per superfície amb espàtula de Drigalski. Es incuba per 24 a 48 hores a 35-37 ° C.

Aquesta metodologia permet realitzar recompte de les colònies típiques obtingudes i és ideal quan es sospita la presència de S. aureus per sobre de 10 UFC per gr / ml de mostra.

Si se sospita que la quantitat de S. aureus és petita o ha molta flora acompanyant, es suggereix enriquir la mostra en brou soja tripticasa amb 10% de NaCl i 1% de piruvat de sodi. Això afavorirà el creixement de S. aureus i s'inhibirà el desenvolupament de la flora acompanyant. Els tubs que resultin tèrbols es sembressin en agar Baird Parker.

Mostres d'aigua

En un sistema de filtració a el buit i esterilitzat es filtren 100 ml d'aigua en estudi, i posteriorment la membrana microporosa de 0,4 micres es retira amb una pinça estèril i es col·loca sobre una placa de Baird Parker. Es incuba per 24 a 48 hores a 35-37 ° C. Aquesta tècnica permet realitzar el recompte de colònies típiques de S. aureus.

Control de qualitat

Per avaluar la qualitat de l'agar Baird Parker es poden utilitzar soques conegudes, com Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 o Proteus mirabilis ATCC 43071.

En el cas de les soques de S. aureus ATCC se sap que redueix el telurito, i són lipasa i lecitinasa positives. Per tant ha d'haver un desenvolupament satisfactori i créixer colònies convexes amb centre negre i vora incolor, amb un halo opac i un altre halo més extern clar.

Per la seva banda, de S. epidermidis s'espera un pobre desenvolupament en aquest mitjà, amb colònies gris marronós a negres, sense halo clar.

Per E. coli i P. mirabilis s'espera que sigui inhibit totalment o parcialment. En cas de créixer es desenvoluparan colònies marrons sense zona opaca, ni halo clar.

recomanacions

-No s'ha d'escalfar el medi després d'afegir el telurito i el rovell d'ou.

-La preparació de l'emulsió de rovell d'ou i el seu agregat en el medi és un pas molt vulnerable de contaminació. S'han d'extremar les cures.

-Si hi ha presència de colònies típiques de S. aureus s'ha de corroborar muntant una prova de coagulasa a aquesta soca.

-Si hi ha resultats dubtosos amb la coagulasa, s'han de muntar altres proves confirmatòries.

Tenir cura de no confondre la presència de colònies típiques de S. aureus amb les colònies atípiques de color negre.

referències

1. Wikipedia contributors. Baird-Parker agar. Viquipèdia The Free Encyclopedia. March 15, 2017, 19:36 UTC. Disponible a: wikipedia.org/ Accessed February 18, 2019.
2. BD Laboratoris. Baird Parker Agar. 2006. Disponible a: bd.com
3. Laboratoris Britània. Baird Parker agar base. 2015. Disponible a: britanialab.com
4. Laboratoris Francisco Soria Melguizo. 2009. Baird Parker Agar. Disponible a:
5. Laboratoris Britània. Telurito de potassi. 2015. Disponible a: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Truja-Leal F, Valenzuela F. portació de Staphylococcus aureus enterotoxigénico tipus A, en frotis nasofaringis a manipuladors d'aliments. Rev Med Xile 2017; 145: 1559-1564
7. Norma Veneçolana Covenin 1292-1289. (1989). Aliments. Aïllament i recompte de Staphylococcus aureus. Disponible a: sencamer.gob.ve