OLI D'IMMERSIÓ: COMPOSICIÓ, CARACTERÍSTIQUES, USOS - BIOLOGIA - 2025

El oli d'immersió és un líquid viscós i transparent que té un alt índex refractiu. Per aquest motiu és molt utilitzat en les observacions microscòpiques, ja que dóna la propietat de concentrar la llum quan aquesta passa a través de l'objectiu de 100X de l'microscopi, augmentant el seu poder de resolució.

Això ocorre a causa de que es forma una pel·lícula viscosa entre l'objectiu i el frotis, impedint que els raigs de llum es dispersin a l'arribar a l'aire, aconseguint concentrar els feixos de llum cap a la mostra.

Goter amb oli d'immersió i Microscopi enfocat amb objectiu de 100X utilitzant oli d'immersió. Font: Pixabay.com

L'oli d'immersió s'usa únicament amb l'objectiu de 100X. És per això que a l'objectiu de 100X se l'anomena també objectiu d'immersió. A la resta se'ls coneix com a objectius secs. Aquest objectiu no pot utilitzar-se sense l'oli d'immersió, ja que sense aquest la visualització no seria satisfactòria.

La funció principal de l'oli d'immersió és brindar imatges més clares, nítides i definides, permetent l'observació de detalls que amb altres objectius no seria possible.

El primer oli utilitzat per aquest fi va ser l'oli d'anís, usat al costat de la primera lent d'immersió creat per Giovanni Battista Amici. Aquest sol evitava l'aberració cromàtica, però no augmentava l'obertura numèrica de sistema de lents.

Després es va utilitzar l'oli de cedre, però va presentar moltes desavantatges que van obligar al seu desús. Entre elles estava la seva alta acidesa, la qual danyava els objectius en un curt termini.

Posteriorment, es van usar altres substàncies com l'aigua i la glicerina fins que es van crear els olis d'immersió sintètics, que a poc a poc van anar perfeccionant fins arribar a l'oli d'immersió actual, el qual és un compost complex de substàncies orgàniques.

Composició de l'oli d'immersió

L'oli d'immersió està constituït per una barreja de compostos orgànics com ara: terfenilo, terfenilo hidrogenat, hidrocarburs naturals i polibutenos.

Característiques de l'oli d'immersió

L'oli d'immersió és un líquid de color groc clar, aspecte lleugerament viscós, d'olor característica i densitat entre 0,92-0,99 g / cm ³.

L'oli d'immersió no és soluble en aigua, i posseeix un punt d'ebullició de 340 ° C. L'índex de refracció a (n 20 ° C / D): oscil·la entre 1,482-1,516. Com a, l'índex d'inflamació és de 110 ° C i la viscositat oscil·la entre 100 a 120 mPa.s.

Aquest producte ha de ser rebutjat de forma adequada, ja que és ecotóxico. És a dir és nociu per a l'ambient, afectant principalment als animals aquàtics. D'altra banda, és irritant de pell i mucoses. Si s'ingereix és nefrotóxico i cardiotòxic.

L'oli d'immersió és estable a 15 a 25 ° C, temperatura a la qual s'ha de conservar.

Fonaments de l'oli d'immersió

A l'usar objectius de major augment s'ha de pujar la intensitat de la llum. No obstant això, molts dels feixos de llum es perden perquè són dispersats a l'arribar a l'aire (espai entre el cobreobjectes i la lent), i fins i tot alguns raigs pateixen una reflexió total.

L'oli d'immersió posseeix un índex de refracció similar a el de el vidre. Per tant, quan es posa en contacte l'oli entre el lent de 100X i el cobreobjectes, els feixos de llum es concentren.

Els raigs concentrats travessen la mostra i augmenten la nitidesa de la imatge, és a dir, augmenta l'obertura numèrica de l'objectiu i corregeix les aberracions cromàtiques i esfèriques.

Usos o aplicacions

L'ús de l'oli d'immersió es fa necessari especialment quan es requereix observar una imatge d'una forma més àmplia, utilitzant per a això l'objectiu de major augment (objectiu de 100X) i així poder veure detalls que són essencials per establir un diagnòstic.

Per tant, és àmpliament utilitzat en estudis microscòpics de diverses àrees com ara: histologia, citolología, hematologia i bacteriologia. Per exemple, és útil per a l'estudi de les característiques de les cèl·lules i els teixits d'un pacient.

També serveix per a l'anàlisi de frotis sanguinis, on es vol detallar característiques de hemoparásitos dins i fora dels eritròcits, així com en les preparacions de Gram, per definir les característiques morfotintoriales dels microorganismes.

En general s'usa en preparacions fixes, ja que no és recomanable en preparacions a la fresca. Això es deu al fet que la tensió superficial de l'oli fa que el cobreobjectes es mogui, el que origina que la mostra es desplaci durant la seva observació i impedeixi la seva anàlisi.

D'altra banda, l'oli d'immersió no només és útil en la microscòpia òptica convencional: també s'usa en microscopis de fluorescència de reflexió interna total (TIRFM) i en les aplicacions de fluorescència confocal.

Passos per observar una preparació utilitzant oli d'immersió

Per veure una preparació a l'microscopi primer s'ha d'enfocar la preparació amb l'objectiu de menor augment, en general el de 10X, amb poca intensitat de llum.

Després es passa a l'objectiu de 40X, i s'augmenta lleugerament el pas de llum. Algunes anàlisis poden realitzar-se amb aquest augment, però per veure detalls estructurals es necessita l'augment de 100X.

Abans de passar a l'objectiu de 100X es col·loca una gota d'oli d'immersió sobre el cobreobjectes, just on es vol observar, i posteriorment es mou el revòlver de l'microscopi per ubicar l'objectiu de 100x en la preparació.

Es regula (augmenta) la intensitat de la llum (movent el condensador i obrint el diafragma). Després, amb uns petits moviments que se li doni a l'cargol micròmetre (cap endavant o cap enrere) s'hauria d'enfocar perfectament si el microscopi fa servir objectius parafocales.

Si s'intenta enfocar la preparació directament amb l'objectiu d'immersió, és possible que hi hagi problemes per trobar l'enfocament. No és una acció impossible, però la dificultat augmenta significativament.

cures

Per utilitzar l'oli d'immersió cal tenir en compte certes condicions.

Quan s'ha realitzat una preparació acolorida, com per exemple un frotis tenyit amb Giemsa o Gram, cal esperar que el frotis s'assequi completament abans de col·locar l'oli d'immersió. Altrament, l'oli juntament amb l'aigua formarà micel·les que no deixaran visualitzar la preparació.

D'altra banda, després d'observar el lot de preparacions, és a dir, a l'acabar la jornada de treball, s'ha de netejar acuradament l'objectiu de 100X, usant un paper per a lents amb etanol. Si es deixa el lent brut, l'oli s'assecarà sobre ell i després serà molt difícil retirar-lo, danyant el camp de visualització.

Així mateix, cal tenir en compte que l'oli és inflamable i s'ha de tenir allunyat de fonts de calor (encenedors). És important evitar escalfar per sobre de 65 ° C.

Finalment, l'oli és un producte tòxic. Per tant s'ha d'evitar el contacte directe amb pell i mucoses, on pot produir irritació lleu. Per evitar accidents, es recomana l'ús de guants i lents de seguretat per manipular-ho.

En cas que es tingui contacte amb l'oli, s'ha de rentar l'àrea amb abundant aigua. Si l'oli esquitxa als ulls, s'ha de rentar de la mateixa manera, mantenint els ulls oberts. En cas d'ingestió accidental, és important ingerir aigua tèbia i induir el vòmit, a més d'acudir a el metge més proper.

referències

1. «Microscopi de fluorescència de reflexió interna total.» Viquipèdia L'enciclopèdia lliure. 30 desembre 2018, 22:46 UTC. 14 maig 2019, 01:54
2. IVD. Microscòpia Oli d'immersió. Disponible a: Users / Equip / Downloads.
3. Biologia i Microbiologia Ambiental. Maneig de l'microscopi òptic. Disponible a: eumed.net/libros.
4. Sánchez Lera Rita Maria, Oliva García Nimfa Rosa. Història de l'microscopi i la seva repercussió en la Microbiologia. Rev Hum Med, 2015; 15 (2): 355-372. Disponible a: Scielo.
5. Herrero J. Practica Nº 1: Fonaments i maneig de l'microscopi òptic compost comú. Universitat d'Alacant Disponible a: rua.ua.es/dspace
6. Scharlau - MSDS. Oli d'immersió, per microscòpia. 2001. Disponible a: insumos-labcentral.