PROVES CREUADES: PER A QUÈ SERVEIXEN, TÈCNICA, FONAMENT, FASES - MEDICINA

Les proves creuades són una sèrie d'estudis de laboratori que es realitzen per determinar si els hemoderivats provinents d'un donant (principalment sang total i concentrat globular) són compatibles amb la sang de l'receptor.

Es tracta d'una prova complementària addicional a la compatibilitat ABO i a el factor Rh. La raó de realitzar les proves creuades rau en què de vegades dos individus (donant-receptor) poden tenir el mateix grup ABO i Rh però tot i així la seva sang és incompatible.

Font: unsplash.com

Tal incompatibilitat es deu a la presència d'anticossos contra una sèrie de proteïnes dels glòbuls vermells conegudes com a antígens menors. Aquests antígens no s'avaluen de rutina tal com es fa amb el grup sanguini (ABO) i el factor Rh.

Això es deu al fet que els antígens menors són molt menys freqüents i tenen una expressió variable en cada individu, per tant és virtualment impossible agrupar-los en categories tal com es fa amb el grup i factor Rh.

En lloc d'això es barregen glòbuls vermells de l'donant amb sèrum de pacient (prova de compatibilitat major) i glòbuls vermells de l'pacient amb sèrum de el donant (prova de compatibilitat menor) per tal de detectar la presència de reaccions antigen-anticòs.

Quan hi anticossos contra antígens menors, bé sigui en el sèrum de pacient o de l'donant, es diu que la prova és positiva, pel que en la majoria dels casos no es pot transfondre aquesta unitat de sang en particular.

grup ABO

Per comprendre bé que es tracten les reaccions creuades primer és menester conèixer els fonaments sobre grups sanguinis.

En aquest sentit el més important és saber que la sang es pot classificar en quatre grups: A, B, AB i O.

Cada un d'aquests grups expressa sobre la superfície dels glòbuls vermells una proteïna particular (antigen), la qual és identificada com un element aliè pels anticossos d'un potencial receptor d'un grup diferent.

El més cridaner de les reaccions antigen-anticòs en la compatibilitat de la sang és que no es requereix exposició prèvia a l'antigen perquè hi hagi anticossos. A això se li coneix com anticossos naturals.

anticossos naturals

Generalment, perquè hi hagi anticossos en l'organisme d'un individu, cal que els glòbuls blancs de la mateixa hagin estat exposats prèviament a l'antigen.

Això vol dir que en el primer contacte entre l'antigen estrany i l'organisme no existeixen anticossos, ja que aquests es generen més tard, després de l'contacte inicial. Per tant, és impossible que el sistema immune tingui anticossos contra per exemple un virus particular, si no ha estat exposat a la mateixa en el passat.

L'única excepció al que s'ha exposat són els antígens anti AB. En aquests casos, la persona presenta anticossos contra l'antigen que no tenen els seus glòbuls vermells tot i que mai hagi estat en contacte amb glòbuls vermells d'una altra persona. A això se li coneix com anticossos naturals.

Antígens i anticossos relacionats amb el grup sanguini

Els grups sanguinis estan determinats en el cas de el sistema ABO per la presència d'antígens específics (A o B) en la membrana dels glòbuls vermells i, en contraposició, anticossos contra l'antigen absent en la membrana de l'eritròcit.

Així doncs, una persona amb grup de sang A expressa antigen A a la superfície de les seves glòbuls vermells, mentre que al sèrum hi ha anticossos anti-B.

Per contra, en els pacients de el grup B es troba l'antigen B mentre que els anticossos són anti-A.

Ara bé, els pacients amb sang AB posseeixen antígens tant A com B. Per tant no hi ha anticossos ja que de fer-ho destruirien els glòbuls vermells d'aquesta persona.

Tot el contrari ocorre en el grup O, on la membrana de l'eritròcit no presenta cap dels dos antigen (ni A ni B), mentre que en el sèrum hi ha anticossos anti-A i anti-B.

Incompatibilitat de grup ABO

De l'anteriorment exposat es pot deduir fàcilment la compatibilitat dels grups sanguinis ABO, ja que a l'saber l'antigen de la membrana eritrocitària automàticament es coneixen els anticossos en el sèrum. Així doncs:

- La sang A és compatible amb el grup A i el grup O.

- El grup sanguini B és compatible amb sang B i O.

- Les persones amb grup O només poden rebre sang O (ja que tenen anticossos anti-A i anti-B), encara que la seva sang és rebuda per tots els altres grups sense problemes ja que no té antígens.

- Finalment. qui tenen grup sanguini AB poden rebre sang de tots els altres grups (A, B, O i per descomptat AB), atès que no posseeixen anticossos contra cap dels antígens. No obstant això, només poden rebre sang AB les persones de el grup AB, ja que tots els altres grups tenen anticossos que destruirien aquests glòbuls vermells.

antígens menors

Tal com succeeix amb els grups ABO, en la superfície dels eritròcits es poden trobar una sèrie de proteïnes que funcionen com a antígens a l'igual que succeeix amb els antígens de el grup ABO.

No obstant això aquests antígens no es presenten en tots els individus. La seva combinació és heterogènia i la penetrància (nivell d'expressió de la proteïna) és variable, per tant resulta impossible una classificació en grups com la que existeix per ABO i Rh. D'allí deriva el seu nom de «antígens menors», també coneguts com «antígens de baixa incidència».

Encara que no són freqüents, poden existir anticossos naturals contra els antígens menors. Entre ells els més comuns són Lewis, MNSs, anti N, Kell, Duffy, anti FYB i Kidd. Tots ells responsables de reaccions hemolítiques i postransfusionals molt greus.

A més es pot donar el cas de sensibilització contra antígens menors per contacte previ, ja siguin amb aquestes proteïnes antigèniques causa de transfusions prèvies o causa de immunitat creuada.

immunitat creuada

Es diu que hi ha immunitat creuada quan dos antígens provinents de dues fonts diferents (per exemple un glòbul vermell i un bacteri) són molt similars, a al punt que els anticossos contra una d'aquestes proteïnes antigèniques reacciona també amb l'altra causa que són gairebé idèntiques.

Per comprendre-ho millor, prengui l'exemple hipotètic previ (antígens d'un glòbul vermell i un bacteri). En cap dels dos casos hi ha anticossos naturals, però si una persona s'exposa al bacteri generarà anticossos contra la mateixa.

Tals anticossos reaccionaran més tard contra un glòbul vermell si els antígens d'aquest són molt similars als del bacteri que va induir la formació dels anticossos.

Si això passa, els glòbuls vermells amb aquesta proteïna antigènica particular no poden ser administrats a la persona que té els anticossos, ja que hauria rebuig. Aquí rau la importància de les reaccions creuades.

Per a què serveixen les proves creuades

Atès que és impossible caracteritzar en grups la sang de diferents individus amb base en els antígens menors, l'única manera de saber si a la sang d'una persona hi ha anticossos contra els antígens menors dels glòbuls vermells d'una altra és a través de les proves creuades.

En aquells casos on els anticossos són presents es desencadena una reacció d'hemòlisi o d'aglutinació per la qual cosa es conclou que la reacció va ser positiva; és a dir, hi ha anticossos contra antígens menors (encara que no se sap amb exactitud com). En cas contrari la prova és negativa.

fonament

Les proves creuades es fonamenten en la reacció antigen-anticòs. Per tant, amb elles és possible detectar si en el sèrum d'un receptor hi ha anticossos contra els antígens dels glòbuls vermells de l'donant (o viceversa) induint una reacció antigen-anticòs.

Si no hi ha anticossos no es dóna cap reacció i la prova es reporta com a negativa. Per contra, si la reacció és positiva (hi ha hemòlisi o aglutinació durant la prova) es pot concloure que els anticossos són presents.

En aquest sentit, és important destacar que pot haver anticossos contra els glòbuls vermells tant en el sèrum de el donant com en el de l'receptor. Aquest és el motiu de que existeixin dos tipus de reaccions creuades.

Tipus de reaccions creuades

És possible que hi hagi anticossos contra els eritròcits de l'donant en el sèrum de el pacient; però també pot donar-se el cas contrari, és a dir, anticossos en el sèrum de el donant contra els glòbuls vermells de l'pacient.

És per això que hi ha dos tipus de proves creuades:

- Prova creuada gran.

- Prova creuada menor.

Tots dos tipus es realitzen de rutina al banc de sang abans de transfondre hemoderivats, atès que de ser positiva alguna de les proves hi alt risc de reaccions transfusionals que poden arribar a posar en perill la vida de l'pacient.

Prova creuada major

En aquesta prova s'avalua si en el sèrum de el receptor hi ha anticossos contra els glòbuls vermells de l'donant.

Si això passa, no es poden administrar els hemoderivats, ja que una gran quantitat de anticuepos presents en el plasma de l'pacient destruiran molt ràpid els glòbuls vermells de l'donant, generant en el procés reaccions catastròfiques en el cos de l'receptor. Aquestes reaccions són tan severes que poden arribar a amenaçar la seva vida.

Prova creuada menor

En aquest cas es determina si en el sèrum de el donant ha anticossos contra els glòbuls vermells de l'receptor.

Si és així, els anticossos començaran a destruir els eritròcits de el receptor. No obstant això atès que la quantitat d'anticossos és limitada, la reacció és de menor intensitat; encara que no deixa de ser perillosa.

fases

Tant la prova creuada major com la menor es divideixen en tres fases:

- Salina.

- Tèrmica o d'incubació.

- Coombs.

A la primera fase els glòbuls vermells i el sèrum es barregen en solució salina. Posteriorment s'afegeix albúmina, i s'incuba la mostra a 37º C per 30 minuts per finalment procedir amb la fase de coombs.

tècnica

La tècnica de les proves creuades és relativament senzilla, ja que consisteix a afegir glòbuls vermells de l'donant a l'sèrum de pacient (prova creuada major) així com eritròcits de el receptor a l'sèrum de el donant (prova creuada menor).

Per tal d'induir la reacció antigen-anticòs en un lapse relativament breu, s'ha de procedir amb una sèrie de passos estandarditzats. Aquests passos es resumeixen de manera simplificada a continuació.

És important tenir en compte que en el següent apartat es descriu la prova de compatibilitat més gran, tot i que els passos són els mateixos per a la de compatibilitat menor, però intercanviant l'origen de glòbuls vermells i sèrum.

fase salina

- Afegir a un tub d'assaig 2 gotes de sèrum de el receptor (de l'donant si es tracta de la prova creuada menor).

- Prendre un mostra de glòbuls vermells de l'donant (de el receptor si es tracta de la prova creuada menor).

- Rentar i centrifugar els glòbuls vermells.

- Ressuspendre en una solució entre 3% i 5%.

- Posar una gota d'aquesta solució al tub que conté el sèrum de el receptor.

- Barrejar suaument.

- Centrifugar.

- Llegir el resultat en llum de visualització.

fase Tèrmica

- Afegir 2 gotes d'albúmina a l'22% a el tub on es va completar la fase salina.

- Incubar a 37ºC per 30 minuts.

- Centrifugar per 15 segons.

- Llegir el resultat en llum de visualització.

Fase de Coombs

- Prendre les cèl·lules de l'tub i rentar-les amb solució salina.

- Eliminar el sobrenedant.

- Afegir dues gotes de reactiu de Coombs.